Cell Total RNS Isolation Kit Total RNS Isolation Purification Kits from cell
A készlet leírása:
Különféle tenyésztett sejtekből 11 perc alatt nagy tisztaságú és jó minőségű össz-RNS nyerhető.
RNáz-mentes
Szobahőmérsékleten működik (15-25 ℃)
DNS-tisztító oszloppal
Magas RNS hozam
Gyors: Fejezd be az extrakciót 11 perc alatt
Biztonság: Nincs Szerves vegyszer
Leírás
Ez a készlet a Foregene által kifejlesztett spin oszlopot és formulát használja, amely hatékonyan képes nagy tisztaságú és jó minőségű teljes RNS-t kinyerni a 96, 24, 12 és 6 lyukú lemezeken tenyésztett sejtekből.
A készlet hatékony DNS-tisztító oszlopot biztosít, amely könnyen elválasztja a felülúszót és a sejtlizátumot, megköti és eltávolítja a genomiális DNS-t.A művelet egyszerű és időtakarékos.
TA csak RNS-t tartalmazó oszlop egyedülálló képlettel képes hatékonyan megkötni az RNS-t.Nagyszámú minta egyidejűleg feldolgozható.
Kit összetevők
| Kit összetétel | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| puffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| cRL2 puffer | 15 ml | 60 ml |
| Puffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Puffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNáz-mentes ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Csak RNS-t tartalmazó oszlop | 50 | 200 |
| DNS-tisztító oszlop | 50 | 200 |
| Utasítás | 1 | 1 |
*Kérjük, viseljen kesztyűt és tegyen óvintézkedéseket a művelet során, mivel a cRL1 és az RW1 puffer irritáló kaotróp sókat tartalmaz.
Jellemzők és előnyök
■ Az egész folyamat szobahőmérsékleten (15-25 ℃) zajlik, jeges fürdő és alacsony hőmérsékletű centrifugálás nélkül.
■ Az egész készlet RNáz-mentes, nem kell aggódnia az RNS lebomlása miatt.
■ A DNS-tisztító oszlop specifikusan megköti a DNS-t, így a készlet képes eltávolítani a genomi DNS-szennyeződést további DNáz hozzáadása nélkül.
■ Magas RNS-hozam: csak RNS-t tartalmazó oszlop és egyedülálló formula hatékonyan tisztítja az RNS-t.
■ Gyors sebesség: könnyen kezelhető és 11 perc alatt teljesíthető.
■ Biztonság: Nincs szükség szerves reagensre.
■ Kiváló minőség: A tisztított RNS nagy tisztaságú, fehérje- és egyéb szennyeződésektől mentes, és számos későbbi kísérletnek megfelel.
Kit alkalmazás
Alkalmas teljes RNS extrakciójára és tisztítására tenyésztett sejtekből 96, 24, 12 és 6 lyukú lemezeken.
Munkafolyamat
Diagram
A Cell Total RNA Isolation Kit agaróz gél akkumulátor diagramja a fenti különböző számú sejtet kezelte, 20 μl térfogatú elúció, 2 μl tisztított össz RNS 1%.
Tárolás és eltarthatóság
A készlet 12 hónapig szobahőmérsékleten (15-25 ℃) vagy 2-8 ℃ hosszabb ideig (24 hónapig) tárolható.
A cRL1 puffer 4 ℃-on 1 hónapig tárolható a 2-hidroxi-1-etántiol (opcionális) hozzáadása után.
Az RNS-t nem vonják ki, vagy az RNS-hozamok alacsonyak
Gyakran számos tényező befolyásolja a hasznosítás hatékonyságát, például: szövetminta RNS-tartalma, működési módja, elúciós térfogat stb.
1. Működés közben jégfürdőt vagy kriogén (4 °C) centrifugálást végeztünk.
Javaslat: Működtesse szobahőmérsékleten (15-25 °C) az egész folyamat során, ne jeges fürdőt és alacsony hőmérsékleten centrifugáljon.
2. Nem megfelelő mintatartósítás vagy túl hosszú mintatárolási idő.
Javaslat: Tárolja a mintákat -80 °C-on vagy fagyassza le folyékony nitrogénben, és kerülje az ismételt fagyasztás-olvasztás használatát;próbáljon meg friss szövetet vagy tenyésztett sejteket használni az RNS-kivonáshoz.
3. A minta elégtelen lízise.
Javaslat: A szövetek homogenizálása során ügyeljen arra, hogy a szövet megfelelően homogenizálva legyen, és a szöveti sejtek megfelelően hasadjanak ahhoz, hogy megmagyarázzák az RNS felszabadulását.
4. Az eluens hozzáadása nem megfelelő.
Javaslat: Ellenőrizze, hogy az RNase-Free ddH2O-t csepegtetünk a tisztítóoszlop membránjának közepéhez.
5. Nem a megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adtuk az RL2 vagy RW2 pufferhez.
Javaslat: Kövesse az utasításokat, adjon hozzá megfelelő mennyiségű abszolút etanolt az RL2 és RW2 pufferhez, és jól keverje össze a készlet használata előtt.
6. A szövetminta adagolása nem megfelelő.
Javaslat: 10-20 mg szövetet vagy (1-5) × 10-et használjon6sejtek 500 μl RL1 pufferenként, mivel a túlzott szövethasználat csökkent RNS-kivonást eredményezhet.
7. Nem megfelelő elúciós térfogat vagy nem teljes elúció.
Javaslat: A tisztítóoszlop elúciós térfogata 50-200 μl;ha az elúciós hatás nem kielégítő, akkor javasolt a szobahőmérsékletű elhelyezési időt meghosszabbítani az előmelegített RNase-Free ddH hozzáadása után2O, pl. 5-10 percig.
8. A tisztító oszlopban etanol maradvány található az RW2 pufferrel történő mosás után.
Javaslat: Ha az RW2 puffer mosása, 1 perces üres cső centrifugálása után etanol maradvány van, az üres cső centrifugálási műveletének ideje 2 percre növelhető, vagy a tisztító oszlopot szobahőmérsékleten 5 percre helyezhetjük, hogy megfelelően eltávolítsuk a maradék etanolt.
A tisztított RNS lebomlik
A tisztított RNS minősége olyan tényezőktől függ, mint a minta megőrzése, az RNáz szennyeződés, a manipuláció stb.
1. A szövetmintákat nem tartják meg időben.
Javaslat: Ha a szövetmintákat vagy sejteket a gyűjtés után nem használják fel kellő időben, azonnal tartsa mélyhűtve -80 °C-on vagy folyékony nitrogénben.Az RNS kivonásához használjon újonnan vett szövet- vagy sejtmintát, amikor csak lehetséges.
2. Szövetminták ismételt fagyasztása-olvasztása.
Javaslat: A szövetminták tárolása során konzerválás céljából a legjobb kis darabokra vágni, felhasználáskor pedig eltávolítani az egyik darabot, hogy elkerüljük a minta ismételt fagyasztását-olvasztását és az RNS lebomlását.
3. Az RNáz bekerült, vagy nem visel eldobható kesztyűt, maszkot stb. a művelet során.
Javaslat: Az RNS extrakciós kísérleteket legjobban külön RNS-manipulációs helyiségekben végezni, és a kísérlet előtt le kell tisztítani az asztalt.
Viseljen eldobható kesztyűt és maszkot a kísérlet során, hogy minimalizálja az RNS-nek az RNáz bejutása által okozott lebomlását.
4. A reagensek használat közben RNázzal szennyezettek.
Javaslat: Cserélje ki egy új Animal Total RNS Isolation Kit-re a kapcsolódó kísérletekhez.
5. Az RNS manipulációhoz használt centrifugacsövek, csúcsok stb. RNázzal szennyezettek.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RNS-kivonáshoz használt centrifugacsövek, hegyek, pipetták stb. mind RNáz-mentesek.
A tisztított kapott RNS befolyásolja a downstream kísérleteket
A tisztító oszlopon tisztított RNS, ha a sóionok, a fehérjetartalom túl nagy, befolyásolja a downstream kísérletet, például: reverz transzkripció, Northern Blot et al.
1. Az eluált RNS sóion-maradékokat tartalmaz.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy a megfelelő mennyiségű etanolt hozzáadta az RW2 pufferhez, és végezzen 2 tisztító oszlopmosást a működéshez jelzett centrifugális sebességgel;Ha van sóion-maradék, hagyja a tisztító oszlopot az RW2 pufferben 5 percig szobahőmérsékleten, és végezze el a centrifugálást a sószennyeződés maximális eltávolítása érdekében.
2. Etanol maradék az eluált RNS-ben.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RW2 puffer mosása után az üres cső centrifugálási műveletét a működésre jelzett centrifugálási sebességgel hajtsa végre, növelje az üres cső centrifugálási műveletének idejét 2 percre, ha még van etanol maradék, vagy hagyja szobahőmérsékleten 5 percig
