Plant Total RNS Isolation Kit Total RNS Purificaiton Kit alacsony poliszacharid- és polifenoltartalmú növényekhez
Műszaki adatok
50 előkészület, 200 előkészület
A készlet a Foregene által kifejlesztett spin oszlopot és formulát használja, amely hatékonyan képes nagy tisztaságú és jó minőségű teljes RNS-t kivonni különböző növényi szövetekből alacsony poliszacharid- és polifenoltartalommal.Magas poliszacharid- vagy polifenoltartalmú növényi minták esetén a Plant Total RNA Isolation Plus Kit használata javasolt a jobb RNS extrakciós eredmények elérése érdekében.A készlet tartalmazza a DNS-tisztító oszlopot, amely könnyen eltávolíthatja a genomiális DNS-t a felülúszóból és a szöveti lizátumból.A csak RNS-t tartalmazó oszlop hatékonyan képes megkötni az RNS-t.A készlet egyszerre nagy számú mintát képes feldolgozni.
A teljes rendszer nem tartalmaz RNázt, így a tisztított RNS nem bomlik le.A PRW1 és PRW2 puffer biztosítja, hogy a kapott RNS ne legyen szennyezve fehérjével, DNS-sel, ionokkal és szerves vegyületekkel.
Kit összetevők
| PSL1 puffer, PS puffer, PSL2 puffer |
| PRW1 puffer, PRW2 puffer |
| RNáz-mentes ddH2O, DNS-tisztító oszlop |
| Csak RNS-t tartalmazó oszlop |
| Utasítás |
Jellemzők és előnyök
■ Működés szobahőmérsékleten (15-25 ℃) a teljes folyamat alatt, jeges fürdő és alacsony hőmérsékletű centrifugálás nélkül.
■ A teljes készlet RNáz-mentes, nem kell aggódnia az RNS lebomlása miatt.
■ A DNS-tisztító oszlop specifikusan kötődik a DNS-hez, így a készlet képes eltávolítani a genomi DNS-szennyeződést DNáz hozzáadása nélkül.
■ Magas RNS-hozam: csak RNS-t tartalmazó oszlop és egyedülálló formula hatékonyan tisztítja az RNS-t.
■ Gyors sebesség: könnyen kezelhető, és 30 percen belül befejezhető.
■ Biztonság: nincs szükség szerves reagensre.
■ Kiváló minőség: A tisztított RNS-fragmensek nagy tisztaságúak, fehérjéktől és egyéb szennyeződésektől mentesek, és különféle, későbbi kísérleti alkalmazásoknak is megfelelnek.
Kit alkalmazás
Alkalmas alacsony poliszacharid és polifenol tartalmú friss vagy fagyasztott növényi szövetmintákból (főleg friss növényi levélszövetből) teljes RNS extrakciójára és tisztítására.
Munkafolyamat
Diagram
A Plant Total RNA Isolation Kit Plus 50 mg friss poliszacharid- és polifenollevelet dolgozott fel, és az 5%-os tisztított RNS-t elektroforézissel teszteltük.
1: Banán
2: Ginkgo
3: pamut
4: Gránátalma
Tárolás és eltarthatóság
A készlet szobahőmérsékleten (15-25 ℃) száraz környezetben 12 hónapig, hosszabb ideig (24 hónapig) 2-8 ℃ között tárolható.
A PSL1 puffer 4 ℃-on 1 hónapig tárolható a 2-hidroxi-1-etántiol (opcionális) hozzáadása után.
Problémaelemzési útmutató
Az alábbi elemzés azokról a problémákról, amelyekkel találkozhatNövény összesenRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
A forgó oszlop eltömődött
A spin oszlop blokkolása az RNS-hozam csökkenését, vagy akár az RNS kinyeréséhez való tisztítását sem eredményezi, és a kapott RNS minősége alacsony lesz.
Gyakori okok elemzése:
1. A minta nem törött teljesen.
A nem teljes minta fragmentáció blokkolhatja a DNS-tisztító oszlopot, ami szintén befolyásolhatja az RNS hozamát és minőségét.Javasoljuk, hogy a mintadarabolás végrehajtásakor gyorsan őröljön be elegendő mennyiségű folyékony nitrogént, hogy a minták szövetei, például sejtfala és sejtmembránja a lehető legnagyobb mértékben megtörjön.A polifenol poliszacharidok növényi mintáihoz javasoljuk a Plant Total RNA Isolation Kit Plus használatát.
2. Szívja le a DNS-tisztító oszlopból izolált felülúszót, szívja le a lehetséges sejttörmelék-pelletet.
A leszívott sejttörmelék pellet eltömítheti a csak RNS-t tartalmazó oszlopot az RNS-adszorpciós eljárások során (lásd az eljárás 5. lépését, a poliszacharid polifenol eljárás 6. lépését).Javasoljuk, hogy ügyeljen a felülúszó leszívásakor, hogy elkerülje a sejttörmelékek leszívását.
3. A kezdeti mintamennyiség túl nagy.
A túlzott mintahasználat a minta tökéletlen fragmentálódását vagy a sejtek nem teljes lízisét eredményezi a PRL1 puffer vagy a PSL1 puffer által, ami a tisztítási műveletekhez eltömődött tisztítóoszlopot eredményez.A Plant Total RNA Isolation Kit kezdeti maximum 50 mg-ot tartalmaz egy kezelt minta egyszeri tisztítására.A polifenol-poliszacharidok növényi mintáihoz javasoljuk, hogy próbálja ki a Plant Total RNA Isolation Kit Plus-t.
4. A centrifuga hőmérséklete túl alacsony.
A teljes RNS izolálása és tisztítása, kivéve a mintaszövet folyékony nitrogénnel való szétszakítását, minden lépést szobahőmérsékleten (20-25 °C) végeznek.Egyes alacsony hőmérsékletű centrifugák hőmérséklete 20 °C alatt van, ami eltömődést okozhat a DNS-tisztító oszlopban és/vagy a csak RNS-t tartalmazó oszlopban.Ha ez megtörténik, állítsa a centrifuga hőmérsékletét 20-25 °C-ra, és melegítse elő a líziselegyet és/vagy az etanol elválasztó felülúszó hozzáadását 37 °C-ra.
Nem extrahált RNS, vagy az RNS-hozam alacsony
Általában sok tényező befolyásolja a visszanyerés hatékonyságát, mint például: minta RNS-tartalma, műveleti módszer, elúciós térfogat stb.
A gyakori okok elemzése az alábbiak szerint:
1.Jégfürdőt vagy alacsony hőmérsékletű (4°C) centrifugálást végeztünk a művelet során.
Javaslat: Működtesse szobahőmérsékleten (15-25°C) a teljes folyamat során, ne végezzen jeges fürdőt és alacsony hőmérsékletű centrifugálást.
2.Az RNS lebomlott a minta nem megfelelő tartósítása vagy a minta hosszú távú tartósítása miatt.
Javaslat: A frissen gyűjtött mintákat gyorsan le kell fagyasztani folyékony nitrogénben, majd hosszú ideig -80°C-on tárolni, kerülni kell a minták ismételt fagyasztását és felolvasztását;vagy azonnal áztassa a mintákat RNS-stabilizátor RNAlater oldatba (állati minták).
3.A minta elégtelen fragmentációja és lízise a tisztítóoszlop eltömődéséhez vezet.
Javaslat: A szövet őrlésekor ügyeljen arra, hogy a szövet megfelelően őrölve legyen, és gyorsan vigye át az előre elkészített PSL1 pufferbe (ellenőrizze, hogy a β-ME megfelelő arányban lett-e hozzáadva, lásd az eljárás 1. lépését).
4. Az eluenst helytelenül adtuk hozzá.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RNase-Free ddH2O-t csepegtetünk a tisztítóoszlop membránjának közepébe.
5. Nem a megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adták a PSL2 vagy PRW2 pufferhez.
Javaslat: Kérjük, kövesse az utasításokat, adjon megfelelő mennyiségű abszolút etanolt a PSL2 és a PRW2 pufferhez, és jól keverje össze a készlet használata előtt.
6. A szövetminta mennyisége nem megfelelő.
Javaslat: 50 mg szövetet használjon 500 μl PSL1 pufferhez.Túl sok szövet használata csökkenti a kivont RNS mennyiségét, és a kapott RNS tisztasága is csökken.Nyomatékosan javasoljuk, hogy a kezdeti mintaadag ne haladja meg az 50 mg-ot RNS extrakciós műveletenként.
7. Nem megfelelő elúciós térfogat vagy nem teljes elúció.
Javaslat: A tisztító oszlop eluens térfogata 50-200 μl;ha az elúciós hatás nem kielégítő, ajánlatos meghosszabbítani az időt szobahőmérsékleten az előmelegített RNase-Free ddH hozzáadása után2O, például 5-10 perc.
8. A tisztítóoszlopon etanol-maradék van a PRW2 pufferrel történő mosás után.
Javaslat: Ha az üres csövet 1 percig centrifugálják, és a PRW2 pufferben történő mosás után még maradt etanol, növelheti az üres cső centrifugálásának idejét 2 percre, vagy helyezze a tisztító oszlopot szobahőmérsékleten 5 percre, hogy teljesen eltávolítsa a maradék etanolt.
9. A készletet nem megfelelően használták.
Javaslat: A polifenolos poliszacharidok növényi mintáinál előfordulhat, hogy az olyan általános készletekkel, mint a Plant Total RNA Isolation Kit, nem lehet ideális RNS-mintákat nyerni.Javasoljuk a Plant Total RNA IsolationKit Plus használatát, amelyet kifejezetten polifenol poliszacharid növényi mintákhoz fejlesztettek ki.Kifejezetten polifenol és poliszacharid növényi mintákból RNS kinyerésére kifejlesztett készlet.
Az OD260/OD280 érték alacsony
RNS-elúció ddH-val2Az O és a spektrofotométer leolvasásához használt alacsony OD260/OD280 értékeket eredményez.Javasoljuk, hogy használjon 10 mM Tris-HCl-t, pH 7,5 (RNase-Free ddH helyett2O az RNS eluálásához), hogy viszonylag helyes OD260/OD280 értékeket kapjunk, lásd „RNS-koncentrációs és tisztítási vizsgálatok” a 19. oldalon.
A tisztított RNS lebomlik
A tisztított RNS minősége olyan tényezőktől függ, mint a minta megőrzése, az RNáz szennyeződés és a manipuláció.
A gyakori okok elemzése:
1. A szövetmintákat a gyűjtés után nem tárolták időben.
Javaslat: Ha a szövetmintákat a begyűjtést követően nem használják fel időben, azonnal alacsony hőmérsékleten folyékony nitrogénben tárolják, vagy folyékony nitrogénben történő gyorsfagyasztás után helyezzék át -80°C-ra hosszú távú tárolásra, vagy azonnal merítsék a mintákat RNS-stabilizátor RNAlater oldatba (állati minták).Az RNS-kivonáshoz próbáljon meg frissen gyűjtött szövetmintákat használni.
2. A szövetminták ismételt fagyasztása és felengedése.
Javaslat: A szövetminták tárolása során konzerválás céljából célszerű kis darabokra vágni, felhasználáskor egy részét kiszedni, hogy elkerüljük a minták ismételt fagyasztása és felengedése miatti RNS lebomlását.
3.Az RNase-t bevezetik a műtőbe, vagy nem viselnek eldobható kesztyűt, maszkot stb.
Javaslat: Az RNS-kivonási kísérleteket legjobban külön RNS-műveletekben végezni, és a kísérlet előtt le kell tisztítani a laboratóriumi asztalt, és a kísérlet során eldobható kesztyűt és maszkot kell viselni, hogy az RNáz bejutása által okozott RNS degradációt a lehető legnagyobb mértékben elkerüljük.
4. A reagenst használat közben RNáz szennyezi.
Javaslat: Cserélje ki a növényi teljes RNS extrakciós készletek új sorozatára a kapcsolódó kísérletekhez.
5. Az RNS-manipulációhoz használt centrifugacsövek és pipettahegyek RNázzal szennyezettek.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RNS-kivonáshoz használt centrifugacsövek, pipettahegyek, pipetták stb. mind RNáz-mentesek.
Használati útmutatók:
