Vírus-DNS és RNS izolációs készlet Vírus DNS és RNS extrakciós tisztítás előkészítő készletek
Műszaki adatok
50 előkészület, 200 előkészület
A Viral RNA Nukleinsav Purification Extraction Isolation Kit a Foregene által kifejlesztett spin oszlopot és formulát használja, amely hatékonyan képes kivonni a nagy tisztaságú és jó minőségű vírus RNS-t olyan mintákból, mint a plazma, szérum, sejtmentes testfolyadék és sejttenyészet felülúszója.A készlet kifejezetten Linear Acrylamide-ot ad hozzá, amely könnyen befoghat kis mennyiségű RNS-t a mintákból.A csak RNS-t tartalmazó oszlop hatékonyan képes megkötni az RNS-t.A készlet egyszerre nagy számú mintát képes feldolgozni.
A teljes készlet nem tartalmaz RNázt, így a tisztított RNS nem bomlik le.A viRW1 puffer és a viRW2 puffer biztosítja, hogy a kapott virális nukleinsav mentes legyen fehérjétől, nukleáztól vagy egyéb szennyeződésektől, amely közvetlenül felhasználható a downstream molekuláris biológiai kísérletekhez.
Kit összetevők
Lineáris akrilamid |
DRL puffer |
Puffer RW1, Buffer RW2 |
RNáz-mentes ddH2O |
DNS/RNS oszlop |
Utasítás |
Jellemzők és előnyök
■ Működés szobahőmérsékleten (15-25 ℃) a teljes folyamat alatt, jeges fürdő és alacsony hőmérsékletű centrifugálás nélkül.
■ A teljes készlet RNáz-mentes, nem kell aggódnia az RNS lebomlása miatt.
■ Magas nukleinsavhozam: csak DNS/RNS Az oszlop és az egyedülálló formula hatékonyan tisztítja a DNS-t és az RNS-t.
■ Nagy mintafeldolgozási kapacitás: akár 200μl minta is feldolgozható minden alkalommal.
■ Gyors sebesség: könnyen kezelhető, és 20 percen belül befejezhető.
■ Biztonság: nincs szükség szerves reagensre.
■ Kiváló minőség: A tisztított RNS-fragmensek nagy tisztaságúak, fehérjéktől és egyéb szennyeződésektől mentesek, és különféle, későbbi kísérleti alkalmazásoknak is megfelelnek.
Kit alkalmazás
Alkalmas vírusos nukleinsavak kivonására és tisztítására olyan mintákban, mint a plazma, szérum, sejtmentes testfolyadék és sejttenyészet felülúszója.
Munkafolyamat
Diagram
Tárolás és eltarthatóság
■ Ez a készlet 24 hónapig tárolható száraz körülmények között szobahőmérsékleten (15-25 ℃);ha hosszabb ideig kell tárolni, 2-8 ℃ között tárolható.
■ A lineáris akrilamid oldat szobahőmérsékleten 7 napig tárolható;a készlet kézhezvétele után kérjük, vegye ki és tárolja -20°C-on.
■ Lineáris akrilamid hozzáadása után a puffer DRL-hez 2-8°C-on legfeljebb 48 óráig tárolható.Kérjük, használja a kész oldatot.
Problémaelemzési útmutató
Az alábbiakban a vírus DNS/RNS kinyerése során felmerülő problémák elemzését mutatjuk be, remélve, hogy hasznosak lehetnek a kísérletekben.Ezenkívül a kezelési utasításokon és a problémaelemzésen kívüli egyéb kísérleti vagy műszaki problémák esetén külön műszaki támogatást biztosítunk.Ha bármilyen igénye van, forduljon hozzánk: 028-83360257 vagy E-mail:
Tech@foregene.com.
Nincs nukleinsav extrakció vagy alacsony nukleinsavhozam
Általában sok tényező befolyásolja a visszanyerés hatékonyságát, mint például: minta nukleinsav tartalma, műveleti módszer, elúciós térfogat stb.
A gyakori okok elemzése:
1. Az eljárás során jeges fürdőt vagy alacsony hőmérsékletű (4°C) centrifugálást végeztünk.
Javaslat: Működtesse szobahőmérsékleten (15-25°C) az egész folyamat során, ne jeges fürdőt és alacsony hőmérsékletű centrifugálást.
2. A mintát nem megfelelően tárolták, vagy a mintát túl sokáig tárolták.
Javaslat: Tárolja a mintákat -80°C-on, és kerülje az ismételt fagyasztást és felengedést;próbáljon meg frissen gyűjtött mintákat használni a nukleinsav-kivonáshoz.
3. A minta elégtelen lízise.
Javaslat: Ügyeljen arra, hogy a mintát és a lízis munkaoldatot alaposan összekeverje, és szobahőmérsékleten (15-25°C) 10 percig inkubálja.
4. Az eluens helytelen hozzáadása.
Javaslat: Ügyeljen arra, hogy az RNase-Free ddH2O-t cseppenként adjon hozzá a tisztítóoszlop membránjának közepéhez, és ne cseppentse a tisztítóoszlop gyűrűjére.
5. Nem a megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adtunk az RW2 pufferhez.
Javaslat: Kérjük, kövesse az utasításokat, adjon hozzá megfelelő mennyiségű abszolút etanolt az RW2 pufferhez, és jól keverje össze a készlet használata előtt.
6. Nem megfelelő mintatérfogat.
Javaslat: Minden 500 µl puffer DRL-hez 200 µl mintát dolgozunk fel.A túlzott mintafeldolgozás alacsonyabb nukleinsav-kivonási hozamot eredményez.
7. Nem megfelelő elúciós térfogat vagy nem teljes elúció.
Javaslat: A tisztító oszlop eluens térfogata 30-50μl;ha az elúciós hatás nem kielégítő, ajánlatos meghosszabbítani az időt szobahőmérsékleten az előmelegített RNase-Free ddH2O hozzáadása után, például 5-10 perccel.
8. RW2 pufferrel történő mosás után etanol marad az oszlopon.
Javaslat: Ha az RW2 pufferrel végzett 2 perces centrifugálás után etanol marad, az oszlopot centrifugálás után 5 percre szobahőmérsékleten helyezhetjük el, hogy teljesen eltávolítsuk a maradék etanolt.
A tisztított nukleinsav lebomlik
A tisztított nukleinsav minősége összefügg a minta megőrzésével, az RNáz szennyezettséggel, a működéssel és egyéb tényezőkkel.A gyakori okok elemzése:
1. A begyűjtött mintákat nem tároltuk időben.
Javaslat: Ha a mintát a begyűjtést követően időben nem használják fel, azonnal tárolja -80°C-on alacsony hőmérsékleten.Az RNS-kivonáshoz próbáljon meg frissen gyűjtött mintákat használni.
2. Gyűjtsön mintát, és ismételten fagyassza le és olvassa fel.
Javaslat: Kerülje a fagyasztást és felolvasztást (legfeljebb egyszer) a minták gyűjtése és tárolása során, ellenkező esetben csökken a nukleinsav termelés.
3. Az RNase-t bevezetik a műtőbe, vagy nem viselnek eldobható kesztyűt, maszkot stb.
Javaslat: Az RNS extrakciós kísérleteket célszerű külön RNS-műtőben végezni, a laboratóriumi asztalt a kísérlet előtt meg kell tisztítani.
Viseljen eldobható kesztyűt és maszkot a kísérlet során, hogy elkerülje az RNáz bejutása által okozott RNS lebomlását a lehető legnagyobb mértékben.
4. A reagens használat közben RNázzal szennyeződött.
Javaslat: Cserélje ki egy új vírus DNS/RNS izolációs készlettel a kapcsolódó kísérletekhez.
5. Az RNS-manipulációhoz használt centrifugacsövek és pipettahegyek RNázzal szennyezettek.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RNS-kivonáshoz használt centrifugacsövek, pipettahegyek, pipetták stb. mind RNáz-mentesek.
A tisztított nukleinsav hatással van a downstream kísérletekre
A tisztító oszlop által tisztított DNS és RNS túl magas sóion- és fehérjetartalma befolyásolja a downstream kísérleteket, mint pl.: PCR amplifikáció, reverz transzkripció, stb.
1. Az eluált DNS és RNS maradék sóionokat tartalmaz.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adtunk az RW2 pufferhez, és mossa át a tisztító oszlopot kétszer a kezelési útmutatóban megadott centrifugálási sebességgel;Végezzen centrifugálást a sóion-szennyeződés minimalizálása érdekében.
2. Az eluált DNS-ben és RNS-ben etanolmaradékok vannak.
Javaslat: Az RW2 pufferrel végzett mosás megerősítése után végezzen üres cső centrifugálást a kezelési útmutatóban megadott centrifugálási sebességgel;Ha még mindig van etanolmaradvány, akkor az üres csövet centrifugálhatja, majd 5 percre szobahőmérsékletre helyezheti, hogy a lehető legnagyobb mértékben eltávolítsa az etanolmaradékot.
Használati útmutatók:
Vírus DNS és RNS izolációs készlet használati útmutatója