Bevezetés:

Az RNS, tudományos neve ribonukleinsav, rövidítése a RiboNucleic Acid szóból származik, egy olyan nukleinsav típus, amely legalább tucatnyi ribonukleotid összekapcsolásával jön létre foszfodiészter kötéseken keresztül.

Az RNS feltárásának előfeltétele a szennyezésmentes Total RNS kinyerése, és az RNS extrakció alapelve nagyjából a következőképpen foglalható össze:

1. Először bontsa meg a sejteket

2. Ezután távolítsa el a makromolekuláris szennyeződéseket (fehérjék, lipidek, DNS stb.)

3. Végül az RNS-t kicsapják, miközben eltávolítják a sókat és a szerves oldószereket, és tovább tisztítják az RNS-t.

Az extrakciós módszer múltja és jelene

Az RNS extrakciós módszer első generációja a TRIzol precipitációs módszer (reagensként guanidin-izotiocianát, fenol, kloroform stb.) Piotr Chomczynski nagypapa és Nicoletta Sacchi nagymama által kitalált, mert ez a találmány lehetővé teszi az RNS extrakciót Gyorsan és egyszerűen, azóta indult az RNS-kutatás felfutása.

Később nagypapa eladta ezt a szabadalmat az Invitrogennek, és az Invitrogen ezt a módszert népszerűsítette a világgal, és széles körben használt módszerré vált.

Később az Invitrogent a Thermo!

Reprezentatív termék: Invitrogen TRIzol reagense

A TRIzol kicsapásos módszer azonban többszörös kicsapást és RNS extrakciót igényel, a felhasznált reagensek pedig mérgezőek, és hosszú ideig tartanak a működésük során.

Ezért jött létre a második generációs oszlopos enzimes tisztítási módszer, amely szilikagél membránt használ specifikus nukleinsav adszorpciós anyagként, hogy maximalizálja az RNS kinyerését a mintában, miközben eltávolítja az egyéb szennyeződéseket.

A második generációs módszer a stabil teljesítmény alapján egyszerűsíti a műveletet, csökkenti a kockázati tényezőt, javítja az RNS-kivonás hatékonyságát.

Reprezentatív termékek: QIAGEN RNeasy és a legtöbb hazai termék

Mindazonáltal mind az első, mind a második generációs módszerhez DNáz használata szükséges a DNS-szennyeződés eltávolításához, ami némi kényelmetlenséget okoz a későbbi kísérletekben.A maradék DNáz csökkenti a reverz transzkripció hatékonyságát és csökkenti az első szál cDNS szintézisét, ezáltal befolyásolja az eredmények pontosságát.

Ezért a harmadik generációs extrakciós módszert a második generáció alapján optimalizálják.A kísérlethez nincs szükség enzimek hozzáadására, és az RNS könnyen előállítható mindössze két oszloppal.

1. oszlop: DNS-tisztítás Oszlop a DNS tisztításához

2. oszlop: csak RNS Az oszlop specifikusan adszorbeálja és visszanyeri az RNS-t

Egy ilyen egyszerű művelet nem csak időt takarít meg, hanem megkönnyíti a downstream kísérletek végrehajtását is!

Reprezentatív termékek: QIAGEN RNeasy Plus ésForegeneRNS tisztítás sorozat termékei

(RNeasy Plus)

（ForegenéPlant Total RNS Isolation Kit)

Mondd meg halkan!A Foregene RNS készlete egy szuper könnyen használható RNase Eraser-t is tartalmaz, amely 1 perc alatt 400 μg RNázt képes teljesen eltávolítani a szilárd felületről anélkül, hogy mérgező anyagokat adna az emberi szervezethez!

kép1: Működési folyamatok összehasonlító diagramja

A Foregene termékei mindössze két dalban képesek befejezni az RNS-kivonást, ne tegyél féltékennyé másokat a kísérletedre!

kép2:Ekísérleti eredmények összehasonlító táblázat

Az első generáció (1: TRIzol)

A második generáció (2: QIAGEN RNeasy)

A harmadik generáció (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foregene)

kép3: qPCR grafikon (amplifikációs görbe grafikonja)

Az első generáció (a zöld jelentése TRIzol -, a piros a TRIzol +)

A második generáció (az ég kék jelentése QIAGEN RNeasy-, a piros a QIAGEN RNeasy +)

A harmadik generáció (a kék a QIAGEN RNeasy plust, a zöld azt jelenti, hogy Foregene)

(Megjegyzés: A „-” qPCR grafikon azt jelzi, hogy a DNázt nem adták hozzá és a DNS-szennyeződést nem távolították el. Ezért a CT magasabb és az eredmény nem pontos; a „+” azt jelzi, hogy DNázt adtak hozzá és a DNS-szennyeződést eltávolították, az eredmény pontos)

Minden technikai frissítés azt jelenti, hogy a kísérlet működése egyszerűbb és felhasználóbarátabb irányba fejlődik.

A Foregene célja, hogy több tudományos kutatót segítsen megtakarítani a kísérleti időt és költséget, kiváló minőségű kísérleti eredményeket érjen el, és közösen értékesebb tudományos kutatási eredményeket hozzon létre.