Az alábbi elemzés a lehetséges problémákrólBukkálistampon/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

A tisztító oszlop eltömődött

Ebben a kitben a genomiális DNS extrakciós műveletben a tisztító oszlop közvetlenül adszorbeálódik a minta enzimatikus lízis keverékén, centrifugálási lépés nélkül, és a tisztító oszlop blokkolható lehet a hiányos enzimesítés és a minta magas viszkozitása miatt.

A következő lehetséges okok a következők:

1. Szövetminták nem teljes enzimatikus emésztése.

Javaslat: A Foregene Protease mintafeldolgozási ideje megfelelően meghosszabbítható, vagy a felülúszót 12 000 fordulat/perc (~13 400) centrifugálás után vehetjük fel.× g) 5 percig.

2. Szövetminták vagy nagyméretű szövetek túlzott használata.

Javaslat: A legjobb, ha nem haladja meg az 1-etBukkális tampon a mintában;ha a minta túl nagy, akkor ennek megfelelően növelje az ST1 puffer, a Foregene Protease és az ST2 puffer adagját.

3. A minta viszkozitása túl magas.

Javaslat: A mintákat megfelelően hígíthatjuk 10 mM Tris-HCl-lel a genomiális DNS extrakció előtt.

4. A vérkártya töredékeit kiszívták.

Javaslat: A vérfolt (FTA Card) genomi extrakció 6. lépésének átmeneti centrifugálási ideje megfelelően meghosszabbítható.

Alacsony hozam vagy nincs DNS

A genomi DNS-hozamot gyakran számos tényező befolyásolja, beleértve a minta eredetét, a minta tárolási körülményeit, a minta előkészítését, a manipulációt stb.

Az extrakció során nem nyerhető genomi DNS

A lehetséges okok a következők:

1. A minták nem megfelelő tartósítása vagy túl hosszú tárolása genomi DNS lebomlásához vezet.

Javaslat: A szájüregből lehetőleg friss mintát kell venni, és nem tanácsos konzervált mintát használni a genomikus DNS-kivonási műveletekhez;a vérfoltmintáknak biztosítaniuk kell a minőség megfelelőségét, és a tárolási idő sem lehet túl hosszú.

2. A túl kevés szövethasználat azt eredményezheti, hogy a megfelelő genomiális DNS nem válik ki.

Javaslat: Kövesse abuccal a tamponmintavételi utasításokat a kezelési útmutatóban, és a lehető legtöbbször törölje le, hogy elegendő sejtet tudjon rögzíteni az orális tampont a genomikus DNS-kivonáshoz;vérfolt minta kinyeréséhez a vérfolt vágási területe megfelelően növelhető.

3. A Foregene Protease nem megfelelően tartósított, ami aktivitásának csökkenését vagy inaktiválását eredményezi.

Javaslat: Ellenőrizze a tárolási feltételeketaz FOregene Protease vagy cserélje ki egy új Foregene Protease enzimreakcióhoz.

4. A készlet nem megfelelő tartósítása vagy a tárolási idő túl hosszú, ami a készlet egyes alkatrészeinek meghibásodását eredményezi.

Javaslat: Vásároljon újatBukkális tampon DNSelkülönítés készlet a kapcsolódó eljárásokhoz.

5. A WB puffer nem ad hozzá abszolút etanolt.

Javaslat: Győződjön meg arról, hogy a WB puffer megfelelő mennyiségű abszolút etanolt ad hozzá.

6. Az eluens nincs megfelelően hozzáadva a szilikonfilmhez.

Javaslat: Add hozzá a 65-öt°CAz előmelegített eluens a szilikon membrán közepére esik, és hagyja szobahőmérsékleten 5 percig, hogy növelje az elúciós hatékonyságot.

Low-yield genomi DNS izolált

A következő lehetséges okok a következők:

1. A minták nem megfelelő tartósítása vagy túl hosszú tárolása genomi DNS lebomlásához vezet.

Javaslat: A szájüregi tamponokból lehetőleg friss mintát kell venni, és a tartósított tamponokat nem szabad genomikus DNS-kinyeréshez használni.

2. Ha a szövetminta mennyisége túl kicsi, a kivont genomiális DNS-tartalom kisebb lesz.

Javaslat: Kövesse a kezelési útmutatóban található szájüregi tampont mintavételi utasításait, törölje le a lehető legtöbbször, hogy elegendő sejtet tudjon rögzíteni a szájtörlőhöz a genomiális DNS-kinyeréshez.

3. A Foregene Protease nem megfelelően tartósított, ami aktivitásának csökkenését vagy inaktiválását eredményezi.

Javaslat: Ellenőrizze a tárolási feltételeketthe Foregen Protease vagy cserélje ki egy újjal Foregén proteáz enzimes reakcióhoz.

4. Eluens problémák.

Javaslat: Használjon EB puffert az elúcióhoz;ha ddH-t használunk₂O vagy más eluensek ellenőrizze, hogy az eluátum pH-ja 7,0-8,5 között van.

5. Az eluátum cseppenkénti adagolása nem megfelelő.

Javaslat: Adjon eluenscseppeket a szilikon membrán közepéhez, és hagyja szobahőmérsékleten 5 percig az elúció hatékonyságának növelése érdekében.

6. Az elúciós folyadék túl kevés halmozódik fel.

Javaslat: Használjon eluenst a genomiális DNS-elúcióhoz legalább a használati utasításban előírtak szerintnem kevesebb mint 15μl.

Ló tisztaság of genomiális DNSizolált

Az alacsony genomiális DNS-tisztaság a downstream kísérletek kudarcához vagy nem kielégítő eredményéhez vezethet, mint például: az enzimek nem vághatók fel, a PCR nem kapja meg a kívánt génfragmenst stb.

A lehetséges okok a következők:

1. Heteroprotein szennyezés, RNS szennyezés.

Elemzés: A tisztító oszlopot nem mostuk PW pufferrel;a Puffer PW mosótisztító oszlopot nem a megfelelő centrifugális sebességgel mostuk.

Javaslat: Az etanol hozzáadása előtt győződjön meg arról, hogy nincs csapadék a felülúszóban;ügyeljen arra, hogy a tisztító oszlopot az utasítások szerint mossa ki, és ez a lépés nem hagyható ki.

2. Szennyező ion szennyezés.

Elemzés: A puffer WB mosótisztító oszlopot kihagytuk, vagy csak egyszer mostuk, ami maradék ionos szennyeződést eredményezett.

Javaslat: Ügyeljen arra, hogy a Buffer WB-t kétszer mossa meg az utasításoknak megfelelően, hogy a lehető legnagyobb mértékben eltávolítsa a maradék ionokat.

3. RNS enzim szennyeződés.

Elemzés: Idegen RNázokat adtunk a pufferhez;A puffer PW mosási művelete helytelen volt, ami RNáz maradékokat eredményezett, amelyek befolyásolták a downstream RNS kísérleti műveleteket, például az in vitro transzkripciót.

Javaslat: Foregene sorozatú nukleinsavizolaaz ionkészletek további RNáz hozzáadása nélkül is eltávolíthatják az RNS-t,és így bukkális tampon/FTA kártya DNS izolációs készletneedn't RNáz hozzáadása;feltétlenül kövesse a Puffer PW mosótisztító oszlopra vonatkozó utasításokat, és ez a lépés nem hagyható ki.

4. Etanol maradék.

Elemzés: A WB puffer nem végzett üres cső centrifugálást a tisztító oszlop mosása után.

Javaslat: Végezze el a megfelelő üres cső centrifugálási műveletet az utasításoknak megfelelően.

5. Egyéb szennyeződések.

Elemzés: A mentett minták vagy a speciális minták nem kerülnek előkezelésre.

Javaslat: Alaposan előkezelje a mintát az utasításoknak megfelelően.