1: Időben cserélje ki a kísérleti kellékeket

Állítson be (NTC) negatív kontrollt, és ismételje meg többször.Ha kiderül, hogy PCR-termék szennyezett a laboratóriumban, időben cserélje ki az összes kísérleti kelléket.Például: újrahígítsa és előkészítse a primereket, újra sterilizálja a pipetta hegyét, az EP csövet, a ddH2O-t stb., cserélje ki egy új pipettára, és ideiglenesen kölcsönözzen más laboratóriumokat PCR-kísérletek elvégzésére.A kísérlet folytatása előtt a szennyezett laboratóriumot szellőztetni és ultraibolya sugárzással be kell sugározni, amíg a PCR-termék szennyeződése meg nem szűnik.

2: Hosszabbítsa meg az UV-expozíciós időt

Érdemes megjegyezni, hogy a DNS-szennyeződés eltávolításához a rendszeres ultraibolya sugárzást a szokásosnál 2 órával meg kell hosszabbítani.Ennek ellenére az UV-sugárzás hatása a DNS-szennyeződés kis (200 bp alatti) töredékeinek eltávolítására még mindig nem jó.

Az ultraibolya hullámhossz (nm) általában 254/300 nm, és elegendő 30 percig besugározni.Megjegyzendő, hogy az UV kiválasztásakor a maradék PCR-termékek szennyeződésének kiküszöbölésére, figyelembe kell venni a PCR-termék hosszát és a bázisok eloszlását a termékszekvenciában.Az UV-besugárzás csak hosszú, 500 bp feletti töredékekre hatásos, a rövid töredékekre pedig csekély hatása van.

Az UV besugárzás során a PCR termékben lévő pirimidin bázisok dimereket képeznek.Ezek a dimerek megszakíthatják a kiterjesztést, de a DNS-láncban nem minden pirimidin alkothat dimert, és az UV-sugárzás is megtörheti a dimereket..A dimer képződés mértéke függ az UV hullámhossztól, a pirimidin dimer típusától és a dimer hely melletti nukleotidszekvenciától.Ezért, ha a PCR-rel amplifikált fragmensek kicsik, ajánlott az UNG anti-PCR termékszennyező rendszer használata.

3: Általánosan használt DNS-szennyezés-eltávolítók

Pipetták adagolásakor könnyen keletkeznek aeroszolok, amit nehéz elkerülni, és gyorsan leülepszik.Ezért kétségtelenül jó választás, ha gyakran használunk speciális DNS-szennyezés-fogókat a DNS-szennyezés terjedésének megakadályozására.

4: Használjon UNG szennyezésgátló rendszert

A PCR termék szennyeződésének eltávolítása után a vizsgáló laboratórium használhatja az UNG anti-PCR termékszennyező rendszert a PCR termék szennyeződésének megelőzésére.Az általános laboratóriumokban egyszerű kísérleti felosztásokat végezhet, szigorúan elválaszthatja a PCR termékterületet más területektől, meghatározhat bizonyos laboratóriumi szabályokat és előírásokat, és megfelelő képzést folytathat a PCR termék szennyeződésének megelőzésére.

Javaslatok: Egy ésszerű PCR-laboratórium létrehozása, a jó PCR-környezet fenntartása, a szabványos PCR-műveleti eljárások kialakítása és a kísérletezők szigorú működési tudatosságának ápolása a kulcsa a PCR-kísérletek szennyezésének megelőzésének vagy csökkentésének.