PCR kísérlet SOP létrehozása a kísérleti személyzet viselkedésének szabványosítására.
A kísérletvezető szigorúan betartja az üzemeltetési eljárásokat, minimalizálja az emberi tényezők által okozott PCR-szennyezést, vagy megakadályozza a szennyezés előfordulását.Ezen túlmenően a kísérletvezető rendelkezzen a megfelelő szakmai ismeretekkel és készségekkel, beleértve a kapcsolódó berendezések kezelésében való jártasságot, a teljes munkafolyamat tisztázását, a szennyeződés kezelési módszereinek és a laboratóriumi minőségellenőrzési módszerek elsajátítását, valamint a vizsgálati eredmények helyes értelmezését.
Hozzon létre egy szabványos PCR-laboratóriumot.
A PCR laboratórium alapvetően négy területre oszlik, nevezetesen a reagens előkészítési területre, a mintafeldolgozási területre, az amplifikációs területre és az amplifikációs termék elemzési területére.Az első két terület az erősítés előtti terület, az utolsó két terület pedig az erősítés utáni terület.Az erősítés előtti és az utóerősítési zónát szigorúan el kell különíteni.A kísérleti anyagok, reagensek, írópapír, tollak, tisztítószerek stb. csak az amplifikáció előtti területről áramolhatnak az utóamplifikációs területre, azaz a reagens előkészítési területről → mintafeldolgozási területről → amplifikációs területről → amplifikációs termék elemzési területről, és nem áramolhatnak visszafelé.A laboratóriumi levegőáramlásnak is az amplifikáció előtti területről az utóerősítő területre kell áramolnia, és nem visszafelé.Az ideális PCR laboratórium kialakítása az alábbiakban látható:
A ábra: Ideális PCR laboratóriumi beállítási mód negatív nyomással a pufferhelyiségben
B ábra: Ideális PCR laboratóriumi beállítási mód pozitív nyomással a pufferhelyiségben
Az A. és B. ábrán látható PCR laboratóriumi beállítási diagramok ideálisabb beállítási módnak kell lenniük, és a feltételekkel rendelkező laboratórium erre a módra hivatkozhat a tervezésnél.A közönséges laboratóriumok számára javasolt a PCR amplifikációs terület és a termékelemzési terület elkülönítése, valamint a fedél nyitásának csökkentése a minta előkészítési és a PCR amplifikációs területen.Ne feledje: A termékelemzési területen lévő termékeket és kísérleti eszközöket szigorúan tilos a minta-előkészítési területre és a PCR-amplifikációs területre vinni.
Ha a laboratórium csak PCR kimutatást és azonosítást végez, akkor a hagyományos PCR helyett fluoreszcens kvantitatív PCR alkalmazása javasolt.
A fluoreszcencia kvantitatív PCR detektálási eredményei fluoreszcencia jelekkel gyűjthetők és elemezhetők, így a reakció után nincs szükség az elektroforézis fedelének kinyitására, amivel elkerülhető a reakciótermékek kiszivárgásából adódó PCR termék szennyeződés és aeroszolok képződése.Ha növeli a kupaknyílások számát a gélelektroforézis betöltési lépése során, valószínűleg aeroszolos szennyeződés lép fel.Javasolt a kvantitatív PCR alkalmazásának elősegítése és a kvalitatív PCR fokozatos felváltása.
A PCR reakcióhoz az UNG anti-PCR termékszennyezési rendszert használják.
A rendszer dTTP helyett dUTP-t használ.A PCR-reakció után az összes PCR-terméket (DNS-fragmenseket) beépítjük a dUTP-be;a PCR reakció következő körében a rendszerhez adott UNG enzimet a PCR előtt 5 percig 37°C-on inkubálják, amely képes specifikusan lebontani az összes dUTP-t tartalmazó DNS-fragmenst, majd PCR reakciót hajt végre.Ezzel teljesen eltávolítható a PCR termékek okozta aeroszol szennyeződés.A hatás az alábbi ábrán látható:
Megjegyzés: A közvetlen PCR sorozathoz választhatja a Foregene PCR termékszennyeződés elleni rendszerének sorozattermékeit.Javaslat
A nagyléptékű genotipizálást végző laboratóriumok számára erősen javasolt az UNG anti-PCR termékszennyező rendszer alkalmazása a reagensek tesztelésére az ésszerű laboratóriumok kialakítása mellett.
Emlékeztető: A rendszer használata nem tudja eltávolítani a PCR-termék már okozott szennyeződését.Ezért az UNG rendszert kell használni a vonatkozó vizsgálat elején, és az UNG rendszert kell használni a PCR amplifikációhoz, hogy megakadályozzák a PCR termékek szennyeződését Hamis pozitív.
Javasoljuk, hogy a Foregene Direct PCR-UNG rendszerét használja nagyszabású vizsgálatok elvégzéséhez, mint például:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ez a készletsorozat a Foregene-tőlnemcsak gyorsan és nagy léptékben tudja végrehajtani a PCR-detektálást, hanem hatékonyan megelőzi és szabályozza a PCR-termék szennyeződését.
Feladás időpontja: 2021. március 19
