Az SOP rendszer kiépítése

PCR kísérlet SOP létrehozása a kísérleti személyzet viselkedésének szabványosítására.

A kísérletezők szigorúan betartják az üzemeltetési eljárásokat, minimalizálják az emberi tényezők által okozott PCR-szennyezést, illetve megakadályozzák a szennyezés előfordulását az üzemben.Ezen túlmenően a kísérletvezető rendelkezzen a megfelelő szakmai ismeretekkel és készségekkel, beleértve a kapcsolódó berendezések kezelésében való jártasságot, a teljes munkafolyamat tisztázását, a szennyeződés kezelési módszereinek és a laboratóriumi minőségellenőrzési módszerek elsajátítását, valamint a vizsgálati eredmények helyes értelmezését.

Szabványos PCR Laboratórium építése

A PCR laboratórium alapvetően négy területre oszlik, nevezetesen a reagens előkészítési területre, a mintafeldolgozási területre, az amplifikációs területre és az amplifikációs termék elemzési területére.Az első két terület az erősítés előtti terület, az utolsó két terület pedig az erősítés utáni terület.Az erősítés előtti és az utóerősítési zónát szigorúan el kell különíteni.A kísérleti anyagok, reagensek, írópapír, tollak, tisztítószerek stb. csak az amplifikáció előtti területről áramolhatnak az utóamplifikációs területre, azaz a reagens előkészítési területről, a mintafeldolgozási területről, az amplifikációs területről és az amplifikációs termék elemzési területéről, és nem áramolhatnak ellentétes irányba.A laboratóriumi levegőáramlásnak az amplifikáció előtti területről is az utóerősítő területre kell áramolnia, nem pedig fordított irányba.

Csökkentse a kísérleti lépéseket

Ha a laboratórium csak PCR kimutatást és azonosítást végez, akkor a hagyományos PCR helyett fluoreszcens kvantitatív PCR alkalmazása javasolt.

A fluoreszcens kvantitatív PCR detektálási eredmények fluoreszcens jelekkel gyűjthetők és elemezhetők, így a reakció után nincs szükség az elektroforézis fedelének kinyitására, amivel elkerülhető a PCR-termékek szennyeződése a reakciótermékek kiszivárgása miatt aeroszolokká.Ha növeli a kupaknyílások számát a gélelektroforézis betöltési lépése során, valószínűleg aeroszolos szennyeződés lép fel.Javasolt a kvantitatív PCR alkalmazásának elősegítése és a kvalitatív PCR fokozatos felváltása.

Az UNG környezetszennyezés elleni rendszerének elfogadása

A PCR reakcióhoz az UNG anti-PCR termékszennyezési rendszert használják.

A rendszer dTTP helyett dUTP-t használ.A PCR-reakció után az összes PCR-terméket (DNS-fragmenseket) beépítjük a dUTP-be;a PCR reakció következő körében a rendszerhez adott UNG enzimet 37°C-on 5 percig inkubáljuk a PCR előtt, ami lehet specifikus Lebontjuk az összes dUTP-t tartalmazó DNS fragmentumot, majd végrehajtjuk a PCR reakciót.Ezzel teljesen eltávolítható a PCR termékek okozta aeroszol szennyeződés.A hatás az alábbi ábrán látható:

Megjegyzés: A közvetlen PCR sorozathoz választhatja az FJ Biotech anti-PCR termékszennyező rendszerének sorozattermékeit

Javaslat

A nagyléptékű genotipizálást végző laboratóriumok számára erősen javasolt az UNG anti-PCR termékszennyező rendszer alkalmazása a reagensek tesztelésére az ésszerű laboratóriumok kialakítása mellett.

Emlékeztető: A rendszer használata nem tudja eltávolítani a PCR-termék már okozott szennyeződését.Ezért az UNG rendszert kell használni a vonatkozó vizsgálat elején, és mindig az UNG rendszert kell használni a PCR-amplifikációhoz, hogy elkerüljük a PCR-termékek szennyeződését.Álpozitív.

Javasoljuk, hogy a Forge Biotech Direct PCR-UNG rendszerét használja nagyszabású vizsgálatok elvégzéséhez, mint például: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

A Foregene készletei nemcsak gyorsan és nagy léptékben végeznek PCR-detektálást, hanem hatékonyan megelőzik és szabályozzák a PCR-termékek szennyeződését.