Vezet

Hosszú, nem kódoló RNS, az lncRNS egy nem kódoló RNS, amelynek hossza meghaladja a 200 nukleotidot, általában 200-100 000 nt.Az lncRNS szabályozza a génexpressziót epigenetikai, transzkripciós és poszttranszkripciós szinten, részt vesz az X kromoszóma csendesítésben, a genom imprintingben és a kromatin módosításában, a transzkripció aktiválásában, a transzkripciós interferenciában, a nukleáris transzportban, a sejtciklus szabályozásában, a sejtdifferenciálódás szabályozásában és a dóziskompenzációs hatásokban (a dózissal kapcsolatos kompenzációs folyamatok a humán betegségek kialakulásának és fejlődésének egyike, és sok más folyamata is) a biomedicina területén a forró pontok.

01  Az LncRNS típusai és jellemzői

Az lncRNS a képződésének különböző forrásai szerint sok típusra oszlik, amint az a fenti ábrán látható.A következő jellemzőkkel rendelkezik:

1. Az lncRNS-ek általában hosszabbak, dinamikus expresszióval és különböző splicing módszerekkel a differenciálódás során
2. A kódoló génekhez képest az lncRNS általában alacsonyabb expressziós szinttel rendelkezik
3. A legtöbb lncRNS nyilvánvaló időbeli és térbeli expressziós specifitással rendelkezik a szöveti differenciálódás és fejlődés folyamatában
4. Jellegzetes megnyilvánulásai vannak daganatokban és más betegségekben
5. Az lncRNS szubcelluláris elhelyezkedése változatos
6. A szekvencia alacsony konzerválású, de a funkciónak van bizonyos fokú konzerválása stb.

02 Gyakran ismételt kérdések az LncRNS fordított transzkripciójával kapcsolatban

A sejtek alacsony lncRNS-tartalma, hosszú hosszúsága és magas szintű szerkezete miatt az ilyen RNS-ek gyakran összetett struktúrákkal rendelkeznek, például szárhurkok vagy hajtűk, és az RT-qPCR hajlamos a sikertelen reverz transzkripció vagy az alacsony hatékonyság problémáira.

03 LncRNS reverz transzkripciós oldat

A központi szabály szerint reverz transzkripciónak nevezik azt a folyamatot, amikor az RNS-vírusok saját reverz transzkriptázukat használják a DNS-szintetizáláshoz, RNS-t templátként használva.Reverz transzkripciónak nevezik azt a folyamatot, amikor az RNS-vírus reverz transzkriptázt használjuk cDNS-templát in vitro szintetizálására.A reverz transzkripciós rendszer fő elemei: RNS templát, reverz transzkriptáz, primerek és egyéb komponensek.

1.RNS templát

Az RNS-templát reverz transzkripcióra gyakorolt ​​hatása szerkezetében, tisztaságában és integritásában tükröződik.Minél nagyobb a kivont RNS tisztasága és integritása, annál nagyobb a reverz transzkripció hatékonysága, és annál pontosabbak a későbbi kvantitatív eredmények.Az általánosan használt RNS extrakciós reagensekkel tisztított RNS gyakran tartalmaz alkohol- és guanidinsó-maradékokat, amelyek erős gátló hatást fejtenek ki a legtöbb reverz transzkriptázra.

2.Reverz transzkriptáz

A reverz transzkriptáz kulcsfontosságú befolyást gyakorol a teljes reverz transzkripciós rendszerre.A legtöbb laboratóriumban használt reverz transzkriptáz megfelelő hőmérséklete általában 42 °C.Valójában a magas szintű RNS-struktúra megnyitásához magasabb hőmérsékletre van szükség, és magasabbak a reverz transzkriptázzal szembeni követelmények.

3.Primer

A reverz transzkripciós primerek közé tartoznak a génspecifikus primerek, a random primerek és az Oligo dT primerek.A legtöbb lncRNS nem tartalmaz poliA-farkat, és fontos, hogy a véletlenszerű primereket megfelelően illesszük az Oligo dT-vel.

4.Egyéb alkatrészek

Tekintettel arra, hogy az RNS különösen könnyen lebontható, minimalizálható a reverz transzkripciós rendszerbe olyan komponensek bejutása, amelyek hatékonyan akadályozhatják meg az RNáz bejutását és biztosítják a reverz transzkripció zavartalan lefolyását.

ForegénRNS-templátból nyeri a reverz transzkripciót qPCR-re

Kísérje átfogóan az lncRNS kimutatását

Állati össz-RNS ImegnyugvástKit (gDNS-eltávolító oszloppal)

Sejt teljes RNS ImegnyugvástKit (gDNS-eltávolító oszloppal)

Lnc-RT HeroTM I (gDNázzal) (Super Premix az első szál cDNS szintéziséhez lncRNS-ből)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aelőnyeit ofRNS extrakció:

A készlet a harmadik generációs RNS extrakciós technológiát használja, nincs szükség DNáz használatára.

11 perc 96, 24, 12 és 6 lyukú lemeztenyésztett sejtekből, gDNS-mentes, nagy tisztaságú, jó minőségű teljes sejt RNS nagy hatékonyságú extrakciója.

Az lncRNS reverz transzkripció előnyei:

Speciálisan LncRNS-hez kifejlesztett fordított transzkripciós rendszer a genomi DNS-szennyeződés gyors eltávolítására.

A reverz transzkripciós rendszer nagy termikus stabilitással rendelkezik, és 50 °C-on még mindig jó a fordított transzkripciós teljesítménye.

A magas GC-tartalmú és bonyolult másodlagos szerkezetű sablonok nagy hatékonysággal visszafordíthatók.

Előnyökof qPCR:

A forró indítású Foregene Taq polimeráz nagyobb amplifikációs hatékonysággal, nagyobb amplifikációs érzékenységgel és magasabb amplifikációs specifitással rendelkezik

Az optimalizált Real PCR Easy Mix a SYBR Green I-t magasabb detektálási érzékenységűvé teszi, fluoreszcencia intenzitása pedig 3-5-szöröse a hasonló termékeknek, ami képes kielégíteni a különböző típusú fluoreszcencia kvantitatív kísérletek igényeit.