Mennyit tudsz

N-rőlucleinsav extrakció

A tisztított nukleinsav kezdete és vége

Kezdetben minden nehéz, a tisztított nukleinsav a leginkább

Molekuláris kísérletek kezdeményezése, későbbi kísérletekhez

A sikernek vagy a kudarcnak döntő hatása van.

A Trace/ultra-trace UV spektrofotométert sok tudományos kutató kedveli, mert egyszerűen, gyorsan és gazdaságosan képes kimutatni a nukleinsav-koncentrációt, valamint a fehérje- és sóionmaradványokat.

Mint mindannyian tudjuk, az A260 a nukleinsav abszorbancia OD értéket jelenti, az A280 a fehérje koncentráció abszorbancia OD értéket, az A230 a sóion koncentráció abszorbancia OD értéket, tehát az A260 a nukleinsav koncentrációt tudja átalakítani, az A260/280 a fehérjemaradékot jelenti, az A260/230 a sóion maradékot jelenti, de ez nagyszámú mérési eredmény, és ez csak egy szabályon alapulhagyományos” elhinni, hogy ez megmagyarázhatja a DNS és az RNS tisztaságátbizonyos mértékig.Nem ez az egyetlen szabvány a nukleinsavhozam és -tisztaság azonosítására, csak referenciaként szolgál, és nem „arany standard”.

A Thermo Fisher ND-2000 kézikönyv hangsúlyozza a teszteredmények megbízhatóságát

Ennek oka, hogy a mikro/ultramikro UV spektrofotométerrel kapott eredmények csak oldalról tükrözik a nukleinsav hozamát és tisztaságát, és számos befolyásoló tényező van (optikai út, minta térfogata, mintakoncentráció, pH érték, egyéb ionok, amelyek befolyásolják az abszorbancia mérését stb.), a mért OD érték nem feltétlenül pontos.Ugyanakkor az abszorbanciaérték-meghatározó anyag specifitásának hiánya miatt az egyszálú DNS, a kétszálú DNS, az RNS, a dNTP-k és egyes fehérjék abszorpciós csúcsai 260 nm-es hullámhosszon vannak, és az A260 által önmagában meghatározott koncentráció nem feltétlenül az igazi DNS vagy RNS.A koncentrációt, annak integritását és leépülését nem lehet megítélni.

Tehát hogyan ítéljük meg tisztított nukleinsavunk minőségét?A detektáláshoz mikro/ultramikro UV spektrofotométer használata mellett olyan módszerek is szükségesek, mint az agaróz gél elektroforézis a nukleinsav tisztaságának és integritásának vizuális megjelenítéséhez, valamint a koncentráció bizonyos mértékig történő jelzéséhez.Ily módon a különböző módszerek kimutatási eredményeiből kapott nukleinsavhozam és tisztaság hiteles.

Kísérleti diagram összehasonlítás

A H1299 sejtek genomiális DNS-ét az A cég DNS extrakciós készleteivel extraháltuk, és jelentős szennyező szennyeződést észleltek, ami magas OD értékeket eredményezett.

(OD mérési érték és a megfelelő elektroferogram)

Értékelési index

Létezik-e „arany standard” a nukleinsavhozam és a minőségi vizsgálatnak?

Tudomásunk szerint egyszerű, gyors és olcsó módszer nem létezik.Legyen szó spektrofotométerről, gélelektroforézisről vagy tömegspektrometriáról, mindegyik különböző szempontokból tükrözi az oldatban lévő nukleinsav koncentrációját és tisztaságát, és ezeket egymásra vonatkoztatva kell megítélni.

A legjobb értékelési index mindiga követési kísérleti alkalmazás.Nem befolyásolja a reverz transzkripció és a PCR amplifikáció hatékonyságát.Megbízható amplifikációs termékek és Ct-értékek megszerzése, valamint a szekvenálással teljes szekvencia elérése sikeres nukleinsav-kivonás.

Összefoglalva, a csak arányelmélet nézetét megkérdőjelezheti a „jó downstream kísérleti eredmények jó extrakciós paraméterek használata” nézetével!

Ajánlott Foregene DNS RNS extrakciós készletek a magas DNS/RNS tisztaság eléréséhez:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/