A laboratóriumi vizsgálat a mintavétellel kezdődik, és a mintavételt a legkönnyebb figyelmen kívül hagyni.A mintavételnél a legfontosabb a megfelelő mintatípus kiválasztása, a megfelelő mintavételi eszközök használata, valamint az ésszerű szállítás és feldolgozás.

I.Minta típusa

A gyakori mintatípusok a következők:

A mintavételi módszer hivatkozhat az új koronavírus környezeti monitorozásának műszaki előírásaira a mezőgazdasági kereskedelmi (bazár) piacon”:

1. Tamponminták a torok törlőkendőből, kézből, ruházatból és a gyakorló orvos egyéb tárgyaiból: a vírusmintavevő csőben lévő vírustartósító oldatot kell használni, és a mintavételi pamut törlőkendőket teljesen beszivárogtatni.A talaj felszínét) többször felhordjuk és több mint 3-szor öblítjük.Ugyanakkor a mintavételezett objektum felületén többpontos elosztott mintavételezést kell végezni.

2. Élelmiszerfelületi tamponminták: Az élelmiszermintákat közvetlenül nem lehet gyűjteni.A begyűjtendő élelmiszereket óvatosan szét kell választani, és tiszta mintavételi zsákban kell tárolni, mielőtt tamponmintákat gyűjtenek.A vírusmintavevő csőben lévő vírustartósító oldatot a mintavételi pamut törlőkendő teljes átitatása után szükséges a gyűjteni kívánt élelmiszerminta felületének többszöri bekenése és 3-nál többszöri öblítése.Ugyanakkor a mintafelületen többpontos elosztott mintavételezést kell végezni.

3. Szennyvízminták: A szennyvízelvezető rendszer piaci megoszlása ​​szerint válasszon ki 2-3 szennyvíz-mintavételi helyet, a belső csőhálózati gyűjtésre, a vízáramlási irány lefelé eső részére, vagy a települési csőhálózattal való kapcsolatra összpontosítva.Tamponminta vételéhez egy mintavevő vattacsomóval merítse a szennyvízbe, hogy adszorbeálja a szennyvizet, és öblítse ki a mintavevő csőben több mint 3-szor.Szennyvízminták gyűjtéséhez használjon polietilén műanyag palackokat a 30-500 ml-es szennyvízminták gyűjtéséhez;500 ml-nél nagyobb térfogatú szennyvízgyűjtéshez polietilén műanyag vödrök vagy helyszíni vízminta vételére szolgáló speciális dúsító berendezések használhatók.Ezzel egyidejűleg a szennyvíz mintavételi helyére több ponton elosztott mintavételt kell végezni.

4. Állatminták: Élő állatoknál mintavételi mintavétellel lehet testfelszíni mintát, szájgarat- és végbélmintát venni, illetve ürülék- vagy váladékmintákat is lehet gyűjteni, és ennek megfelelően az adatrögzítő lapon rögzíteni.A nyúzáson stb. átesett állatminták esetében használjon pamut törlőkendőket a testfelületükből és a testüregből vett minták összegyűjtéséhez.A vírusmintavevő csőben lévő vírustartósító oldatot a mintavételi pamut törlőkendő teljes beszivárgására kell használni, majd meg kell ismételni a gyűjtendő élelmiszerminta felületének felvitelét.Shabu több mint 3 alkalommal.Ugyanakkor a mintafelületen többpontos elosztott mintavételezést kell végezni.

5. Egyéb berendezések: állatok szállítására és tenyésztésére szolgáló konténerek, például ketrecek vagy akváriumok.Először figyelje meg vagy értse meg a tárolóedényben tárolt és tenyésztett állatok konkrét típusait, és vegyen mintát a tartály belső faláról, vagy folyékony mintákat a tartalomból.

6. Gyűjtsön aeroszolmintákat olyan helyeken, ahol emberek gyülekeznek, rosszul szellőző helyi kereskedelmi területeken, irodákban és pihenőhelyiségekben.

II.Mintavételi eszközök
1. Vérvétel cső
Ha a későbbiekben nukleinsav vizsgálatot és véralvadásgátló mintát kell végezni, akkor a vérvételhez EDTA antikoagulánst tartalmazó vákuum véredény használata javasolt;szérummintáknál vákuumos véredény használata javasolt, antikoaguláns nélkül.

2. Mintavételi tampon

A kalcium-alginát törlőkendő, illetve a faoszlopos tampon helyett polipropilén törlőkendő használata javasolt, mert ezek bizonyos vírusokat inaktiváló, PCR-vizsgálatot gátló anyagokat tartalmazhatnak.Pamutfejű tampon nem használható, mert a pamutszálak erősen adszorbeálják a fehérjét, és nem könnyen eluálódnak a későbbi tartósító oldatba.

A „Műszaki előírások az új koronavírus-nukleinsavak 10 az 1-ben vegyes gyűjtéséhez és kimutatásához” egyértelműen előírja, hogy „a mintavételi tampon poliészterből, nejlonból és egyéb nem pamut és nem kalcium-alginát anyagból, a nyél pedig nem fa anyagból kell, hogy legyen.A töréspont körülbelül 3 cm-re van a tamponfej tetejétől, ami könnyen eltörhető.”

Az egyesült államokbeli CDC azt is megemlítette, hogy „Csak műanyag- vagy huzalszárú, szintetikus szálból készült tamponokat használjon.Ne használjon kalcium-alginát törlőkendőt vagy faszárú tampont,mivel olyan anyagokat tartalmazhatnak, amelyek egyes vírusokat inaktiválnak és gátolják a PCR-tesztet.

Jelenleg széles körben használják az eldobható steril nylon pelyhesítő pálcikát műanyag rúddal kombinálva.A pelyhesítő pálcikának jobb a vízfelvétele és a kibocsátási sebessége.A különböző mintavételi helyek szerint a tamponfej is eltérő méretű és szálú.A vastagság.”

3. Szállítási tartósítási megoldás minta

Vírusinaktiváló konzerváló oldat: megfelelő mennyiségű guanidinsó-koncentráció és különféle víruslízis-komponensek közvetlenül lizálhatják a vírust, így nukleinsav szabadul fel, inaktiválhatja az RNázt és DNázt, valamint biztosítja a nukleinsav integritását, amely felhasználható a későbbi qPCR kimutatáshoz.Nem használható vírustenyésztésre és izolálásra.

Vírusszállító és konzerváló oldat: a vírus túléléséhez szükséges sókat, aminosavakat, vitaminokat, glükózt és fehérjét tartalmazza, amelyek fenntartják a vírus aktivitását.Használható a jövőben a vírus nukleinsav-kinyerésére, kimutatására, illetve a vírus tenyésztésére és elválasztására is.

4. Mintatartósító cső és mintazsák

A mintatároló csőnek csavaros kupakkal ellátott steril műanyag csőnek kell lennie, amely nem adszorbeálja a nukleinsavat.A minta szivárgásának és szennyeződésének elkerülése érdekében minden mintacsövet le kell takarni egy mintazsákkal.

III.Zavaró anyagok a mintában

Zavaró anyagok a PCR-kísérletekben

1. endogén interferencia

A testmintában jelenlévő anyagok zavarhatják más anyagok kimutatását.

Vér:hem (>1mg/ml), hemin (>0.1ng/μl), trigliceridek, IgG stb.;

Vizelet:karbamid (20 mM);

Szék:növényi poliszacharidok, kolát;

Szövet:proteáz, kollagén;

Tej: proteáz, kalciumion;

Kábítószer: antibiotikumok, vírusellenes szerek, hormonok stb.

Egyéb.

2. exogén interferencia

Olyan anyagokból származik, amelyek megzavarhatják más anyagok in vitro kimutatását.Mintaadalékok és anyagok, amelyek a mintagyűjtés és -feldolgozás során érintkezhetnek:

Teszt kellékek: szérumleválasztó gél, mintagyűjtő tartály és gumidugó, katéter, katéteröblítő folyadék, kesztyűpor stb.

Antikoagulánsheparin (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM) stb.;

Szerves oldószerek: izopropanol (>0,1 IU/ml), betain, dimetil-szulfoxid, formamid, glicerin, PEG stb.;

Fertőtlenítőszerek: alkoholok (etanol>1%), aldehidek, fenolok (fenol>0,2%), peroxidok, erős savak (HCL), erős lúgok (NaOH) stb.;

Mosószer:SDS (>0,005%);

Talaj: Humusz

Festékanyag: Indigó

Egyéb.

Valóságos kültéri mintavételi körülmények között, például környezeti minták gyűjtése esetén a minták sokféle zavaró anyagot tartalmazhatnak, és az egyes helyszíneken eltérő a zavaró anyagok összetétele, ami miatt a PCR interferencia-kísérleteket a helyi viszonyoknak megfelelően kell elvégezni.

IV.Minta tárolási és szállítási feltételek

A frissen gyűjtött klinikai mintákat a gyűjtés után 2–4 órán belül el kell küldeni a laboratóriumba 2°C és 8°C közötti hőmérsékleten.Tárolja 4°C-on 24 órán belül.A vírusizolációhoz és a nukleinsav kimutatáshoz használt mintákat a lehető leghamarabb meg kell vizsgálni.A 24 órán belül tesztelhető minták 4°C-on tárolhatók;azokat a mintákat, amelyeket 24 órán belül nem lehet kimutatni, -70°C-on vagy az alatt kell tárolni (ha nem – 70°C-on, hűtőszekrényben, -20°C-on tárolandó).

Összegzés:A minták szabványosított gyűjtése, szállítása és tárolása elengedhetetlen a későbbi vizsgálatokhoz.Számos laboratóriumi vizsgálat álnegatív eredményét a minták nem megfelelő gyűjtése, szállítása és tárolása okozza, ami a vírusnukleinsav lebomlásához vezet.Sok laboratórium azonban még mindig figyelmen kívül hagyja a mintavétel fontosságát.Remélem, ez a cikk fel tudja ébreszteni mindenki figyelmét a mintavételre, és tudományosabb és ésszerűbb mintavételt tesz lehetővé!

Kapcsolódó termék:

SARS-CoV-2 Variant Nukleinsav-detektáló készlet (I) (Multiplex PCR fluoreszcens szonda módszer) – Brazíliából, Dél-Afrikából és az Egyesült Királyságból származó mutánsok kimutatására