Nemrég felfedeztem valami csodálatosat!Sok tapasztalt kísérletező szakember nem is ismer néhány nagyon alapvető kísérleti tudást.

Tudsz például válaszolni a következő kérdésekre?

Van különbség az OD260 és az A260 között?Mit jelentenek mindegyik?
Az OD az optikai sűrűség (optikai sűrűség) rövidítése, A az abszorbancia (abszorbancia) rövidítése, a két fogalom tulajdonképpen ugyanaz, az „optikai sűrűség” az „abszorbancia”, de az „optikai sűrűség” megfelel a legtöbb nemzeti szabványnak és jobban szabványosított.

Általában az OD értéket 260 nm-en mérjük a nukleinsavkoncentráció kiszámításához, tehát mit jelent az 1OD?
A nukleinsav maximális abszorpciós csúcsa 260 nm hullámhosszon van, amely DNS-t és RNS-t, valamint fragmentált nukleinsav-fragmenseket is tartalmaz (ez a kulcspont).
A 260 nm-es hullámhosszon mért OD értéket OD260-ként vettük fel.Ha a minta tiszta, az OD260 érték ki tudja számítani a nukleinsav minta koncentrációját.
1 OD260=50 μg/ml dsDNS (kétszálú DNS)
=37 μg/ml ssDNS (egyszálú DNS)
=40 μg/ml RNS
=30 μg/ml dNTP-k (oligonukleotidok)
Van valami kapcsolat és különbség az RT-PCR, a Realtime-PCR és a QPCR között?
Az RT-PCR a fordított transzkripciós PCR rövidítése
Real Time PCR=qPCR, a Quantitative Real Time PCR rövidítése
Bár a valós idejű PCR (valós idejű fluoreszcens kvantitatív PCR) és a reverz transzkripciós PCR (reverz transzkripciós PCR) úgy tűnik, hogy mindkettőt RT-PCR-nek rövidítik.De a nemzetközi egyezmény a következő: az RT-PCR kifejezetten a reverz transzkripciós PCR-re vonatkozik.

Melyek az általánosan használt nt, bp és kb értékek a DNS/RNS hosszának leírására a biológiában?
nt = nukleotid
bp = bázispár bázispár
kb = kilobázis

Persze azt mondanád, hogy sok embert nem érdekelnek ezek az apró részletek!Mindenki ezt csinálja, és senki sem fogja megkérdezni, hogy mi az.Tudod, hogy ez felesleges, igaz?

Nem, nem, nem, ezt nagyon szükséges tudni!mi miatt?
Mert cikket szeretne közzétenni!Fiú testvér!Akár érettségire, akár tudományos kutatási eredményekre törekszik, a cikkekre kell hagyatkoznia, hogy beszéljen!

A nukleinsav extrakciónak a legegyszerűbb és legalapvetőbb kísérletnek kell lennie.A nukleinsav extrakció minősége közvetlenül meghatározza a későbbi kísérletek eredményeit.

Bár sokszor mondtam, még mindig sok barát van, akit nem érdekel.Ezúttal úgy döntöttem, hogy kimozdulok a cikkből!

Minimális információ a kvantitatív valós idejű PCR-kísérletek (MIQE) közzétételéhez, egy nemzetközileg elindított fluoreszcencia kvantitatív kísérleti iránymutatás, amely minimális szabványokat javasol a fluoreszcencia kvantitatív PCR-kísérletek értékeléséhez és cikkek publikálásához szükséges kísérleti információkhoz.A kísérletező által biztosított kísérleti feltételek és elemzési módszerek révén a lektorok jobban tudják értékelni a kutató kísérleti sémájának érvényességét.

Látható, hogy a nukleinsav extrakció szakaszában a következő kimutatási tételeket javasolták:

Az „E” a kötelezően megadandó információkat, a „D” pedig azokat az információkat jelöli, amelyeket szükség esetén meg kell adni.

A forma nagyon bonyolult, sőt, azt akarom mondani, hogy mindenkinek ki kell indulnia

tisztaság (D), hozam (D), integritás (E) és konzisztencia (E) a nukleinsavak e négy szempont szerinti értékeléséhez.

A kísérletezési szokásoknak megfelelően először beszéljünk a tisztaság és a koncentráció értékelési módszereiről.

Az OD mérés a kísérletezők kedvenc és legegyszerűbb kimutatási módszere.Ami az elvet illeti, itt nem részletezem.Sok laboratórium manapság ultra-mikro spektrofotométereket használ a nukleinsavminták közvetlen kvantitatív elemzésére.Az abszorbanciaérték megjelenítése közben a program közvetlenül megadja a koncentrációértéket (nukleinsav, fehérje és fluoreszcens festék) és a kapcsolódó arányokat.Ami az OD érték elemzését illeti, mentse el ezt a képet, és minden rendben lesz.

Univerzális OD értékű megoldáslista

Van azonban néhány figyelmeztetés, amelyeket külön kell kiemelni.

(Végül is tudom, hogy ti vagytok azok, akik spórolnak, és megvárják, amíg szükség lesz rájuk!)

1. megjegyzés Berendezés

Az OD értéket különböző berendezések befolyásolják.Amíg az OD260 egy bizonyos tartományon belül van, az OD230 és OD280 értékei értelmesek.Például a közönséges Eppendorf D30 abszorbancia tartománya 260 nm-en 0-3 A, a Thermo NanoDrop One pedig 260 nm-en.Az abszorbancia tartomány 0,5-62,5 A.

Jegyzet 2Hígító reagens

Az OD értéket különböző reagensek hígítása befolyásolhatja.Például a tisztított RNS OD260/280 leolvasása pH-ban7,5 10 mM Trispuffer 1,9-2,1 között van, míg insemleges vizes oldataz arány alacsonyabb lesz, talán csak 1,8-2,0, de ez nem jelenti azt, hogy az RNS minősége megváltozik Különbség.

3. megjegyzésMaradék anyagok

A visszamaradó anyagok megléte befolyásolja a nukleinsavkoncentráció mérésének pontosságát, ezért a nukleinsavmintákban lehetőleg kerülni kell a fehérje-, fenol-, poliszacharid- és polifenolmaradékokat.

Valójában azonban a szerves reagensekkel való extrakció régi módszer.A kereskedelmi készletekben az extrakciós hatás egy szilícium-dioxid alapú adszorpciós oszlopon keresztül érhető el centrifugálással kombinálva, elkerülve a nehezen eltávolítható toxikus és káros szerves reagenseket stb. A probléma, mint pl.A Foregene nukleinsav extrakciós készlete nem használ DNáz/RNázt és toxikus szerves reagenseket a művelet során, gyors és biztonságos, és ahatás azjó(véletlenül azt mondta, hogy kopasz, de tudom, hogy tudni szeretnéd).

1. példa: Genomi DNS extrakció hozama és tisztasága

A Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) különféle forrásokból származó talajmintákat kezel, és a kapott genomiális DNS mennyiségét és tisztaságát az alábbi táblázat mutatja:
2. példa: A szöveti RNS extrakció hozama és tisztasága

Az Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) különféle szövetmintákat dolgozott fel, és a kapott RNS mennyisége és tisztasága az alábbi táblázatban látható (egér szövetek esetében):
Ne gondolja azonban, hogy végzett az OD értékkel.Van valami gondod azokra a kulcspontokra, amelyeket az elején rajzoltam neked?

Értesítés

A töredezett nukleinsavmolekulákat az abszorbanciában is kiszámítjuk.Feltételezve, hogy genomiális DNS-maradékai vannak az RNS-ben, az OD-értéke nagyon magasnak tűnik, de az RNS tényleges koncentrációja nem határozható meg.Nem világos, hogy az Ön RNS-e lebomlott-e, ezért még mindig szükségünk van egy átfogó értékelési módszerre, hogy pontosabb ítéletet adjunk, vagyis a MIQE-ben említett nukleinsav integritás értékelésére.