Az antitestek, más néven immunglobulinok (Ig), olyan glikoproteinek, amelyek specifikusan kötődnek az antigénekhez.
 
A hagyományos antitest-készítményt állatok immunizálásával és antiszérum gyűjtésével állítják elő.Ezért az antiszérum általában más, nem rokon antigének és más fehérjekomponensek elleni antitesteket tartalmaz a szérumban.Az általános antigénmolekulák többnyire több különböző epitópot tartalmaznak, így a hagyományos antitestek is több különböző epitóp elleni antitestek keverékei.Még az ugyanazon epitóp ellen irányuló hagyományos szérum antitestek is különböző B-sejt klónok által termelt heterogén antitestekből állnak.Ezért a hagyományos szérum antitesteket poliklonális antitesteknek vagy röviden poliklonális antitesteknek is nevezik.
 
A monoklonális antitest (monoklonális antitest) egy nagyon egységes antitest, amelyet egyetlen B-sejt klón termel, és csak egy specifikus epitóp ellen irányul.Általában hibridóma technológiával állítják elő – a hibridóma antitest technológia a sejtfúziós technológián alapul, amely egyesíti a B-sejteket a specifikus antitestek és a végtelen növekedési kapacitással rendelkező mielómasejtek B-sejtes hibridómákká történő kiválasztására.Ez a hibridóma sejt a szülősejt jellemzőivel rendelkezik.In vitro korlátlan ideig és halhatatlanul szaporodhat, mint a mielóma sejtek, és képes szintetizálni és kiválasztani specifikus antitesteket, például léplimfocitákat.Klónozással egyetlen hibridóma sejtből származó monoklonális vonal, azaz hibridóma sejtvonal nyerhető.Az általa termelt antitestek nagymértékben homogén antitestek ugyanazon antigéndetermináns ellen, azaz monoklonális antitestek ellen.
 
Az antitestek egy vagy több Y alakú monomerként léteznek (azaz monoklonális antitestek vagy poliklonális antitestek).Mindegyik Y alakú monomer 4 polipeptid láncból áll, köztük két azonos nehéz láncból és két azonos könnyű láncból.A könnyű láncot és a nehéz láncot molekulatömegük alapján nevezik el.Az Y alakú szerkezet teteje a variábilis régió, amely az antigénkötő hely.(Részlet a Detai Bio-Monoclonal Antibody Conceptből)
 
Antitest szerkezet
Nehéz lánc
Ötféle emlős Ig-nehézlánc létezik, amelyeket görög α, δ, ε, γ és μ betűkkel neveznek el.A megfelelő antitesteket IgA-nak, IgD-nek, IgE-nek, IgG-nek és IgM-nek nevezik.A különböző nehézláncok mérete és összetétele eltérő.α és γ körülbelül 450 aminosavat, míg μ és ε körülbelül 550 aminosavat tartalmaznak.
Mindegyik nehézláncnak két régiója van: a konstans régió és a variábilis régió.Minden azonos típusú antitestnek ugyanaz a konstans régiója, de vannak különbségek a különböző típusú antitestek között.A γ, α és δ nehéz láncok konstans régiói három Ig doménből állnak egymás mellett, egy csuklórégióval a rugalmasság növelése érdekében;a μ és ε nehéz láncok konstans régiói 4 Ig doménből állnak.A különböző B-sejtek által termelt antitest nehéz láncának variábilis régiója eltérő, de az ugyanazon B-sejt vagy sejtklón által termelt antitest variábilis régiója azonos, és mindegyik nehéz lánc variábilis régiója körülbelül 110 aminosav hosszúságú., És egyetlen Ig-domént alkotnak.
 
Könnyű lánc
Az emlősökben csak kétféle könnyű lánc létezik: lambda típusú és kappa típusú.Minden könnyű láncnak két kapcsolt doménje van: egy konstans régió és egy variábilis régió.A könnyű lánc hossza körülbelül 211-217 aminosav.Az egyes antitestekben található két könnyű lánc mindig ugyanaz.Az emlősök esetében az egyes antitestekben lévő könnyű láncoknak csak egy típusa van: kappa vagy lambda.Egyes alacsonyabb rendű gerincesekben, például porcos halakban (porcos halakban) és csontos halakban más típusú könnyű láncok is megtalálhatók, mint például a iota (iota) típus.
 
Fab és Fc szegmensek
Az Fc szegmens közvetlenül kombinálható enzimekkel vagy fluoreszcens festékekkel az antitestek megjelölésére.Ez az a rész, ahol az antitest a lemezre szegecselődik az ELISA folyamat során, és ez az a rész, ahol a második antitestet felismerik és megkötik immunprecipitáció, immunblot és immunhisztokémia során.Az antitestek két F(ab) szegmensre és egy Fc szegmensre hidrolizálhatók proteolitikus enzimekkel, például papainnal, vagy letörhetik őket a csuklórégióról pepszinnel, és egy F(ab)2 szegmensre és egy Fc szegmensre hidrolizálhatók.Az IgG antitest-fragmensek néha nagyon hasznosak.Az Fc szegmens hiánya miatt az F(ab) szegmens nem fog kicsapódni az antigénnel, és az immunsejtek sem fogják be in vivo vizsgálatok során.A kis molekuláris fragmentumok és a térhálósító funkció hiánya miatt (az Fc szegmens hiánya miatt) a Fab szegmenst általában radioaktív jelölésre használják funkcionális vizsgálatokban, az Fc szegmenst pedig főként blokkoló szerként használják hisztokémiai festésben.
 
Változó és állandó régiók
A variábilis régió (V-régió) a H-lánc 1/5-én vagy 1/4-én található (körülbelül 118 aminosavat tartalmaz) az N-terminális közelében, és 1/2-én (körülbelül 108-111 aminosavat tartalmaz) az L-lánc N-terminálisának közelében.Mindegyik V-régiónak van egy peptidgyűrűje, amelyet láncon belüli diszulfidkötések alkotnak, és mindegyik peptidgyűrű körülbelül 67-75 aminosavból áll.Az aminosavak összetétele és elrendezése a V régióban meghatározza az antitest antigénkötő specifitását.A V-régióban lévő aminosavak folyamatosan változó típusai és szekvenciája miatt sokféle, eltérő kötőantigénspecifitású antitest képződhet.Az L-lánc és a H-lánc V-régióit VL-nek, illetve VH-nak nevezzük.A VL-ben és VH-ban egyes lokális régiók aminosav-összetétele és szekvenciája nagyobb mértékű eltérést mutat.Ezeket a régiókat hipervariábilis régióknak (HVR) nevezik.A V-régióban lévő nem-HVR részek aminosav-összetétele és elrendezése viszonylag konzervatív, ezt nevezzük keretrégiónak.A VL-ben három hipervariábilis régió található, amelyek általában a 24-34., illetve 89-97. aminosavaknál helyezkednek el.A VL és VH három HVR-jét HVR1-nek, HVR2-nek és HVR3-nak hívják.A röntgenkristály-diffrakció kutatása és elemzése bebizonyította, hogy valóban a hipervariábilis régió az a hely, ahol az antitest antigén kötődik, ezért nevezzük komplementaritást meghatározó régiónak (CDR).A VL és VH HVR1, HVR2 és HVR3 neve rendre CDR1, CDR2 és CDR3.Általában a CDR3 magasabb fokú hipervariabilitást mutat.A hipervariábilis régió az Ig-molekulák idiotípusos determinánsainak fő helye is.A legtöbb esetben a H-lánc fontosabb szerepet játszik az antigénhez való kötődésben.
A konstans régió (C régió)a H-lánc 3/4-én vagy 4/5-én (körülbelül a 119. aminosavtól a C-terminálisig) található a C-terminális közelében, és az 1/2-én (körülbelül 105 aminosavmaradékot tartalmaz) az L-lánc C-terminálisának közelében.A H-lánc minden funkcionális régiója körülbelül 110 aminosavból áll, és egy peptidgyűrűt tartalmaz, amely 50-60 aminosavból áll, amelyeket diszulfidkötések kapcsolnak össze.Ennek a régiónak az aminosav-összetétele és elrendezése viszonylag állandó ugyanabban az állati Ig izotípusú L láncban és azonos H láncban.Ugyanez, csak a megfelelő antigénhez tud specifikusan kötődni, de a C régiójának szerkezete megegyezik, azaz azonos az antigenitása.A ló anti-humán IgG másodlagos antitest (vagy anti-antitest) kombinálható a két A különböző exotoxinok elleni antitestek (IgG) kombinációja lép fel.Ez fontos alapja a másodlagos antitestek előállításának és a fluoreszcein, izotópok, enzimek és más jelölt antitestek alkalmazásának.
 
 
Kapcsolódó termékek:
Cell Direct RT-qPCR készlet