Cell Direct RT qPCR készlet – SYBR GREEN I közvetlen sejtlízishez Sejtkész, egylépéses qRT-PCR készletek
Leírások
Ez a készlet egyedülálló lízispuffer rendszert használ, amely gyorsan képes RNS-t felszabadítani a tenyésztett sejtmintákból RT-qPCR reakciókhoz, ezáltal kiküszöböli az időigényes és fáradságos RNS-tisztítási folyamatot.Az RNS-templát mindössze 7 perc alatt megszerezhető.Az 5×Direct RT Mix és 2×A készletben található közvetlen qPCR Mix-SYBR reagensekkel gyorsan és hatékonyan lehet valós idejű kvantitatív PCR eredményeket kapni.
5×Direct RT Mix és 2×A Direct qPCR Mix-SYBR erős inhibitor toleranciával rendelkezik, és a minták lizátuma közvetlenül használható templátként az RT-qPCR-hez.Ez a készlet az egyedülálló RNS nagy affinitású Foregene reverz transzkriptázt és Hot D-Taq DNS polimerázt, dNTP-ket, MgCl-t tartalmazza.2, reakciópuffer, PCR optimalizáló és stabilizátor.
Műszaki adatok
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit összetevők
| I. rész | CL puffer |
| Foregene Protease Plus II | |
| Puffer ST | |
| rész II | DNS radír |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX referenciafesték | |
| RNáz-mentes ddH2O | |
| Utasítás | |
Jellemzők és előnyök
■Egyszerű és hatékony: a Cell Direct RT technológiával mindössze 7 perc alatt RNS-mintákat lehet venni.
■ A mintaigény kicsi, akár 10 cella is tesztelhető.
■ Nagy áteresztőképesség: gyorsan képes kimutatni az RNS-t a 384, 96, 24, 12, 6 lyukú lemezeken tenyésztett sejtekben.
■ A DNS Eraser gyorsan eltávolíthatja a felszabaduló genomokat, nagymértékben csökkentve a későbbi kísérleti eredményekre gyakorolt hatást.
■ Az optimalizált RT és qPCR rendszer a kétlépcsős RT-PCR reverz transzkripciót hatékonyabbá, a PCR-t specifikusabbá és az RT-qPCR reakciógátlókkal szemben ellenállóbbá teszi.
Kit alkalmazás
Alkalmazási terület: tenyésztett sejtek.
- Mintalízissel felszabaduló RNS: csak a kit RT-qPCR templátjára alkalmazható.
- A készlet a következő célokra használható: génexpressziós elemzés, siRNS-mediált géncsendesítő hatás ellenőrzése, gyógyszerszűrés stb.
Diagram
Tárolás és eltarthatóság
A készlet I. részét 4°C-on kell tárolni;A II. részt -20 ℃-on kell tárolni.
A Foregene Protease Plus II-t 4 °C-on kell tárolni℃, ne fagyassza le -20 ℃-on.
2. reagens×A Direct qPCR Mix-SYBR-t -20 °C-on kell tárolni℃sötétben;gyakori használat esetén 4-en is tárolható℃ rövid távú tároláshoz (10 napon belül felhasználható).
Valós idejű PCR primer tervezési elvek
Forward Primer és Reverse Primer
A valós idejű PCR-nél a primer tervezése nagyon fontos.A primerek a PCR-amplifikáció specifitásához és hatékonyságához kapcsolódnak, és a következő elvek alapján tervezhetők:
Alapozó hossza: 18-30 bp.
GC tartalom: 40-60%.
Tm érték: Primer tervező szoftver, mint például a Primer 5, meg tudja adni az alapozó Tm értékét.Az upstream és a downstream primerek Tm értékeinek a lehető legközelebb kell lenniük.A Tm számítási képlet is használható: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).A PCR végrehajtásakor általában az 5 °C-os primer Tm értéke alatti hőmérsékletet választjuk annealing hőmérsékletként (az összekeverési hőmérséklet megfelelő emelkedése növelheti a PCR reakció specificitását).
Primerek és PCR termékek:
A tervezési primer PCR amplifikációs termék hossza előnyösen 100-150 bp.
A sablon másodlagos szerkezeti területén a tervezési alapozókat lehetőleg kerülni kell.
Kerülje el 2 vagy több komplementer bázis képződését az upstream és downstream primerek 3'-végei között.
A Primer 3′ csatlakozóaljzata nem lehet jelen további 3 egymást követő G-vel vagy C-vel.
Maguknak a primereknek nem lehet komplementer szerkezetük, különben hajtűszerkezet képződik, ami befolyásolja a PCR-amplifikációt.
Az ATCG-t a lehető legegyenletesebben kell elosztani a primerszekvenciában, és a 3'-terminális bázist kerülni kell T-ként.
1. függelék: Cell Direct RT-qPCR Kit komponens-kiegészítő csomag
1.Sejtlízis oldat
|
| |||
| Kit összetevők (24-lyukú lízis rendszer / lyuk) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Részén | CL puffer | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| RészII | DNS radír | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Kit összetevők (20 μl reakciórendszer) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit összetevők (20 μl reakciórendszer) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX referenciafesték | 40 μl | 200 μl |
| RNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Használati útmutatók:
