A GYIK azAnimal Total RNS Isolation Kit

Az alábbi elemzés azokról a problémákról, amelyekkel találkozhatállati szövet/sejt RNS extrakció will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

Az RNS-t nem vonják ki, vagy az RNS-hozamok alacsonyak

Gyakran számos tényező befolyásolja a hasznosítás hatékonyságát, például: szövetminta RNS-tartalma, működési módja, elúciós térfogat stb.

1. Működés közben jégfürdőt vagy kriogén (4 °C) centrifugálást végeztünk.

Javaslat: Működtesse szobahőmérsékleten (15-25 °C) az egész folyamat során, ne jeges fürdőt és alacsony hőmérsékleten centrifugáljon.

2. Nem megfelelő mintatartósítás vagy túl hosszú mintatárolási idő.

Javaslat: Tárolja a mintákat -80 °C-on vagy fagyassza le folyékony nitrogénben, és kerülje az ismételt fagyasztás-olvasztás használatát;próbáljon meg friss szövetet vagy tenyésztett sejteket használni az RNS-kivonáshoz.

3. A minta elégtelen lízise.

Javaslat: A szövetek homogenizálása során ügyeljen arra, hogy a szövet megfelelően homogenizálva legyen, és a szöveti sejtek megfelelően hasadjanak ahhoz, hogy megmagyarázzák az RNS felszabadulását.

4. Az eluens hozzáadása nem megfelelő.

Javaslat: Ellenőrizze, hogy az RNase-Free ddH₂O-t csepegtetünk a tisztítóoszlop membránjának közepéhez.

5. Nem a megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adtuk az RL2 vagy RW2 pufferhez.

Javaslat: Kövesse az utasításokat, adjon hozzá megfelelő mennyiségű abszolút etanolt az RL2 és RW2 pufferhez, és jól keverje össze a készlet használata előtt.

6. A szövetminta adagolása nem megfelelő.

Javaslat: 10-20 mg szövetet vagy (1-5) × 10-et használjon⁶sejtek 500 μl RL1 pufferenként, mivel a túlzott szövethasználat csökkent RNS-kivonást eredményezhet.

7. Nem megfelelő elúciós térfogat vagy nem teljes elúció.

Javaslat: A tisztítóoszlop elúciós térfogata 50-200 μl;ha az elúciós hatás nem kielégítő, akkor javasolt a szobahőmérsékletű elhelyezési időt meghosszabbítani az előmelegített RNase-Free ddH hozzáadása után₂O, pl. 5-10 percig.

8. A tisztító oszlopban etanol maradvány található az RW2 pufferrel történő mosás után.

Javaslat: Ha az RW2 puffer mosása, 1 perces üres cső centrifugálása után etanol maradvány van, az üres cső centrifugálási műveletének ideje 2 percre növelhető, vagy a tisztító oszlopot szobahőmérsékleten 5 percre helyezhetjük, hogy megfelelően eltávolítsuk a maradék etanolt.

A tisztított RNS lebomlik

A tisztított RNS minősége olyan tényezőktől függ, mint a minta megőrzése, az RNáz szennyeződés, a manipuláció stb.

1. A szövetmintákat nem tartják meg időben.

Javaslat: Ha a szövetmintákat vagy sejteket a gyűjtés után nem használják fel kellő időben, azonnal tartsa mélyhűtve -80 °C-on vagy folyékony nitrogénben.Az RNS kivonásához használjon újonnan vett szövet- vagy sejtmintát, amikor csak lehetséges.

2. Szövetminták ismételt fagyasztása-olvasztása.

Javaslat: A szövetminták tárolása során konzerválás céljából a legjobb kis darabokra vágni, felhasználáskor pedig eltávolítani az egyik darabot, hogy elkerüljük a minta ismételt fagyasztását-olvasztását és az RNS lebomlását.

3. Az RNáz bekerült, vagy nem visel eldobható kesztyűt, maszkot stb. a művelet során.

Javaslat: Az RNS extrakciós kísérleteket legjobban külön RNS-manipulációs helyiségekben végezni, és a kísérlet előtt le kell tisztítani az asztalt.

Viseljen eldobható kesztyűt és maszkot a kísérlet során, hogy minimalizálja az RNS-nek az RNáz bejutása által okozott lebomlását.

4. A reagensek használat közben RNázzal szennyezettek.

Javaslat: Cserélje ki egy új Animal Total RNS Isolation Kit-re a kapcsolódó kísérletekhez.

5. Az RNS manipulációhoz használt centrifugacsövek, csúcsok stb. RNázzal szennyezettek.

Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RNS-kivonáshoz használt centrifugacsövek, hegyek, pipetták stb. mind RNáz-mentesek.

A tisztított kapott RNS befolyásolja a downstream kísérleteket

A tisztító oszlopon tisztított RNS, ha a sóionok, a fehérjetartalom túl nagy, befolyásolja a downstream kísérletet, például: reverz transzkripció, Northern Blot et al.

1. Az eluált RNS sóion-maradékokat tartalmaz.

Javaslat: Győződjön meg arról, hogy a megfelelő mennyiségű etanolt hozzáadta az RW2 pufferhez, és végezzen 2 tisztító oszlopmosást a működéshez jelzett centrifugális sebességgel;Ha van sóion-maradék, hagyja a tisztító oszlopot az RW2 pufferben 5 percig szobahőmérsékleten, és végezze el a centrifugálást a sószennyeződés maximális eltávolítása érdekében.

2. Etanol maradék az eluált RNS-ben.

Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RW2 puffer mosása után végezze el az üres cső centrifugálási műveletét a működéshez jelzett centrifugálási sebességgel, növelje az üres cső centrifugálási műveletének idejét 2 percre, ha még van etanol maradék, vagy hagyja szobahőmérsékleten 5 percig az üres cső centrifugálása után, hogy maximalizálja az etanol maradék eltávolítását.

Nulceinsav mintatípusok izolálása

A Foregene RNS-izolációs készletei teljes RNS-izolálást/extrakciót biztosítanak a következő mintaforrásokból: Állati szövetek, növények, sejtek, vírus, vér stb.

Hogyan tároljam a készletet

Szobahőmérsékletű tárolás 24 hónapig.