Animal Total RNS izolációs készlet Teljes RNS extrakciós és tisztító készletek állati szövetekhez és sejtekhez
A készlet leírása:
Gyorsan és hatékonyan vonja ki a nagy tisztaságú és kiváló minőségű teljes RNS-t különböző állati szövetekből.
Nem kell aggódni az RNS lebomlása miatt.Az egész rendszer RNáz-mentes
Hatékonyan távolítsa el a DNS-t a DNS-tisztító oszlop segítségével
Távolítsa el a DNS-t DNáz hozzáadása nélkül
Egyszerű – minden művelet szobahőmérsékleten történik
Gyors – a művelet 30 perc alatt befejezhető
Biztonságos – nem használt szerves reagenst
Nagy tisztaságú – OD260/280≈1,8-2,1
Kits leírások
50 előkészület, 200 előkészület
Ez a készlet aspin oszlop és képletcégünk által kifejlesztett, amely nagy hatékonysággal képes nagy tisztaságú és jó minőségű össz-RNS-t kinyerni különböző állati szövetekből.Hatékony DNS-tisztító oszlopot biztosít, amely egyszerűen és időtakarékosan képes a genomiális DNS-t könnyen elkülöníteni és adszorbeálni a felülúszóból és a szöveti lizátumból;A csak RNS-t tartalmazó oszlop hatékonyan képes megkötni az RNS-t, és egyidejűleg feldolgozható egy egyedülálló formulával. Sok minta.
Az egész rendszer RNáz-mentes, így a kivont RNS nem bomlik le;Puffer RW1, Buffer RW2 puffer mosórendszer, hogy a kapott RNS mentes legyen a fehérje-, DNS-, ion- és szerves vegyületek szennyeződésétől.
Kit összetevők
| Animal Total RNS Isolation Kit | ||
| Kit összetevők | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| RL1 puffer* | 25 ml | 100 ml |
| RL2 puffer | 15 ml | 60 ml |
| Puffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Puffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNáz-mentes ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Csak RNS-t tartalmazó oszlop | 50 | 200 |
| DNS-tisztító oszlop | 50 | 200 |
| Használati utasítás | 1 darab | 1 darab |
Termék információ
| Formátum | Pörgő oszlop | Tisztító komponens | Foregene oszlop, reagens |
| Fényáram | 1-24 minta | Előkészületenkénti idő | ~30 perc (24 minta) |
| Centrifuga | Asztali centrifuga | Pirolízis elválasztás | Centrifugális elválasztás |
| Minta | Állati szövetek;sejt | A minták mennyisége | Szövet: 10-20 mg;Cella:(1-5)×106 |
| Elúciós térfogat | 50-200 μL | Maximális betöltési mennyiség | 850 μl |
Jellemzők és előnyök
■ Nem kell aggódni az RNS lebomlása miatt;az egész rendszer RNáz-mentes
■ Hatékonyan távolítsa el a DNS-t a DNS-tisztító oszlop használatával
■ Távolítsa el a DNS-t DNáz hozzáadása nélkül
■ Az egyszerű műveletek szobahőmérsékleten fejeződnek be
■ A gyors működés 30 perc alatt elvégezhető
■ Biztonságos – nincs szükség szerves reagensre
■ Nagy tisztaságú -OD260/280≈1,8-2,1
Kit alkalmazás
Alkalmas a teljes RNS extrakciójára és tisztítására különféle friss vagy fagyasztott állati szövetekből vagy tenyésztett sejtekből.
A termék paraméterei
■ Downstream alkalmazások: első szálú cDNS szintézis, RT-PCR, molekuláris klónozás, Northern Blot stb.
■ Minták: állati szövetek, tenyésztett sejtek
■ Adagolás: 10-20 mg szövetek, sejtek (2-5) × 106
■ A tisztító oszlop maximális DNS-kötő kapacitása: 80 μg
■ Elúciós térfogat: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNS Isolation Kit kezelt 20 mg
Friss egérminták, vegyünk 5% tisztított össz-RNS 1% agart
Glikogél elektroforézis
1: Lép 2: Vese
3: Máj 4: Szív
Tárolás és eltarthatóság
A készlet szobahőmérsékleten (15-25 ℃) 24 hónapig, hosszabb ideig 2-8 ℃ között tárolható.Az RL1 puffer 4 ℃-on 1 hónapig tárolható a β-merkaptoetanol (opcionális) hozzáadása után.
Idézett cikkek
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R. és mtsai.mRNS-töltött lipidszerű nanorészecskék májbázis szerkesztéshez a központi kompozit tervezés optimalizálásával.Adv.Funkció.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J és mtsai.A terápiás őssejt-készítményben a sejtek spontán apoptózisa immunmoduláló hatást fejt ki a foszfatidil-szerin felszabadulásával.Signal Transduct Target Ther.2021. július 14., 6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17,97: Dai Z, Liu H, Liao J és mások.Az N7-metilguanozin tRNS módosítása fokozza az onkogén mRNS transzlációt és elősegíti az intrahepatikus kolangiokarcinóma progresszióját.Mol Cell.2021. július 29.: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y és mások.A Mettl14 által közvetített m6A módosítás elősegíti a máj regenerálódását az endoplazmatikus retikulum homeosztázisának fenntartásával.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNS izolációs készletek egyéb mintaforrásokelérhetőek:
Sejt, növény, vírus, vér stb.
Az RNS-t nem vonják ki, vagy az RNS-hozamok alacsonyak
Gyakran számos tényező befolyásolja a hasznosítás hatékonyságát, például: szövetminta RNS-tartalma, működési módja, elúciós térfogat stb.
1. Működés közben jégfürdőt vagy kriogén (4 °C) centrifugálást végeztünk.
Javaslat: Működtesse szobahőmérsékleten (15-25 °C) az egész folyamat során, ne jeges fürdőt és alacsony hőmérsékleten centrifugáljon.
2. Nem megfelelő mintatartósítás vagy túl hosszú mintatárolási idő.
Javaslat: Tárolja a mintákat -80 °C-on vagy fagyassza le folyékony nitrogénben, és kerülje az ismételt fagyasztás-olvasztás használatát;próbáljon meg friss szövetet vagy tenyésztett sejteket használni az RNS-kivonáshoz.
3. A minta elégtelen lízise.
Javaslat: A szövetek homogenizálása során ügyeljen arra, hogy a szövet megfelelően homogenizálva legyen, és a szöveti sejtek megfelelően hasadjanak ahhoz, hogy megmagyarázzák az RNS felszabadulását.
4. Az eluens hozzáadása nem megfelelő.
Javaslat: Ellenőrizze, hogy az RNase-Free ddH2O-t csepegtetünk a tisztítóoszlop membránjának közepéhez.
5. Nem a megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adtuk az RL2 vagy RW2 pufferhez.
Javaslat: Kövesse az utasításokat, adjon hozzá megfelelő mennyiségű abszolút etanolt az RL2 és RW2 pufferhez, és jól keverje össze a készlet használata előtt.
6. A szövetminta adagolása nem megfelelő.
Javaslat: 10-20 mg szövetet vagy (1-5) × 10-et használjon6sejtek 500 μl RL1 pufferenként, mivel a túlzott szövethasználat csökkent RNS-kivonást eredményezhet.
7. Nem megfelelő elúciós térfogat vagy nem teljes elúció.
Javaslat: A tisztítóoszlop elúciós térfogata 50-200 μl;ha az elúciós hatás nem kielégítő, akkor javasolt a szobahőmérsékletű elhelyezési időt meghosszabbítani az előmelegített RNase-Free ddH hozzáadása után2O, pl. 5-10 percig.
8. A tisztító oszlopban etanol maradvány található az RW2 pufferrel történő mosás után.
Javaslat: Ha az RW2 puffer mosása, 1 perces üres cső centrifugálása után etanol maradvány van, az üres cső centrifugálási műveletének ideje 2 percre növelhető, vagy a tisztító oszlopot szobahőmérsékleten 5 percre helyezhetjük, hogy megfelelően eltávolítsuk a maradék etanolt.
A tisztított RNS lebomlik
A tisztított RNS minősége olyan tényezőktől függ, mint a minta megőrzése, az RNáz szennyeződés, a manipuláció stb.
1. A szövetmintákat nem tartják meg időben.
Javaslat: Ha a szövetmintákat vagy sejteket a gyűjtés után nem használják fel kellő időben, azonnal tartsa mélyhűtve -80 °C-on vagy folyékony nitrogénben.Az RNS kivonásához használjon újonnan vett szövet- vagy sejtmintát, amikor csak lehetséges.
2. Szövetminták ismételt fagyasztása-olvasztása.
Javaslat: A szövetminták tárolása során konzerválás céljából a legjobb kis darabokra vágni, felhasználáskor pedig eltávolítani az egyik darabot, hogy elkerüljük a minta ismételt fagyasztását-olvasztását és az RNS lebomlását.
3. Az RNáz bekerült, vagy nem visel eldobható kesztyűt, maszkot stb. a művelet során.
Javaslat: Az RNS extrakciós kísérleteket legjobban külön RNS-manipulációs helyiségekben végezni, és a kísérlet előtt le kell tisztítani az asztalt.
Viseljen eldobható kesztyűt és maszkot a kísérlet során, hogy minimalizálja az RNS-nek az RNáz bejutása által okozott lebomlását.
4. A reagensek használat közben RNázzal szennyezettek.
Javaslat: Cserélje ki egy új Animal Total RNS Isolation Kit-re a kapcsolódó kísérletekhez.
5. Az RNS manipulációhoz használt centrifugacsövek, csúcsok stb. RNázzal szennyezettek.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RNS-kivonáshoz használt centrifugacsövek, hegyek, pipetták stb. mind RNáz-mentesek.
A tisztított kapott RNS befolyásolja a downstream kísérleteket
A tisztító oszlopon tisztított RNS, ha a sóionok, a fehérjetartalom túl nagy, befolyásolja a downstream kísérletet, például: reverz transzkripció, Northern Blot et al.
1. Az eluált RNS sóion-maradékokat tartalmaz.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy a megfelelő mennyiségű etanolt hozzáadta az RW2 pufferhez, és végezzen 2 tisztító oszlopmosást a működéshez jelzett centrifugális sebességgel;Ha van sóion-maradék, hagyja a tisztító oszlopot az RW2 pufferben 5 percig szobahőmérsékleten, és végezze el a centrifugálást a sószennyeződés maximális eltávolítása érdekében.
2. Etanol maradék az eluált RNS-ben.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RW2 puffer mosása után végezze el az üres cső centrifugálási műveletét a működéshez jelzett centrifugálási sebességgel, növelje az üres cső centrifugálási műveletének idejét 2 percre, ha még van etanol maradék, vagy hagyja szobahőmérsékleten 5 percig az üres cső centrifugálása után, hogy maximalizálja az etanol maradék eltávolítását.
