Az A260/A230 alacsony arányát általában a 230 nm-en maximális abszorpciós hullámhosszú szennyeződések okozzák.Nézzük, mit tartalmaznak ezek a szennyeződések:

• Gyakori szennyező anyagok	Abszorpciós hullámhossz	Arány hatás
  Fehérje	~230nm és 280nm	Az A egyidejű csökkentése260/A 280és A260/A 280arányok
  Guanidin só	220-240 nm	Csökkentse az A260/A 280hányados
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm és 270nm	Csökkentse az A260/A 280hányados
  EDTA	~230nm	Csökkentse az A260/A 280hányados
  Etanol	230-240 nm	Csökkentse az A260/A 280hányados

 
 
 
A közönséges szennyező anyagok abszorpciós hullámhossza és kontrasztértéke

Protein szennyeződés
A fehérjeszennyezés a nukleinsav extrakciós folyamatában a leggyakoribb szennyezésnek tekinthető.A fehérje a felső és az alsó vizes fázis között találhatóorganikusfázis .A szennyezés egyszerre csökkenti az A260/A280 és az A260/A230 arányt, az A260/A230 arány pedig nyilvánvalóbban változik, mint az A260/A280 arány.
A következő soránfordított átírásor qPCR reakciók, fehérjemaradékok gátolhatják vagy zavarhatják az enzimműködést.A fehérjeszennyeződés elkerülésének legjobb módja, ha a felülúszó leszívásakor szem előtt tartjuk a „inkább kevesebbet, mint többet, sokszor kis mennyiséget” elvét.

2. Guanidinium szennyezés
A hidroklorid (GuHCl) és a guanidin-tiocianát (GTC) fehérjéket denaturáló hatással bír, amelyek a nukleinsav extrakciós folyamata során gyorsan elpusztíthatják a sejtmembránokat, fehérjék denaturálódását és kicsapódását okozva.A GuHCl és a GTC abszorpciós hullámhossza 220-240 nm között van, és aa maradék guanidinium só csökkenti az A260/A230 arányt.Bár a maradék guanidinium só csökkenti az arányt,a downstream kísérletekre gyakorolt ​​hatás valójában elhanyagolható.

3. Trizol szennyeződés
A Trizol fő összetevője a fenol.A fenol fő funkciója a sejtek lízise, ​​valamint fehérjék és nukleinsav anyagok felszabadítása a sejtekben.Bár a fenol hatékonyan képes denaturálni a fehérjéket, nem képes teljesen gátolni az RNáz aktivitást.Ezért 8-hidroxi-kinolint, guanidin-izotiocianátot, β-merkaptoetanolt stb. adnak a TRIzolhoz az endogén és exogén RNáz gátlására.
A sejtes RNS extrakciója során a Trizol gyorsan lizálja a sejteket és gátolja a sejtekből felszabaduló nukleázt, a maradék Trizol pedig jelentősen csökkenti az A260/A230 arányt.
Feldolgozási módszer: Centrifugálásnál figyelembe kell venni, hogy a Trizolban lévő fenol 4°-on és szobahőmérsékleten könnyen oldódik a vizes fázisban.

4. Etanol maradék
A végső folyamatban etanolt használnak a DNS kicsapására, miközben feloldják a DNS-hez kötődő sóionokat.Az abszorpciós hullámhossz a legmagasabbfelszívódási csúcsaaz etanol is 230-240 nm-en van, amicsökkenti az A260/A230 arányt is.
Az etanol-maradék elkerülésének módszere a végső elúció során kétszer megismételhető, befúvatva apáraelszívókét percig, hogy az etanol teljesen elpárologjon, mielőtt puffert adunk hozzá az elúcióhoz.
Tudni kell azonban, hogy az arány csak az RNS minőségének értékelési indexe.Ha a fent említett műveleteket szigorúan szabályozzák, akkor az arány és a standard tartomány közötti eltérés nem lesz nagy hatással a downstream kísérletekre.
Kapcsolódó termékek:
Animal Total RNS Isolation Kit
Plant Total RNS izolációs készlet
Cell Total RNS izolációs készlet
Plant Total RNA Isolation Kit Plus