Plant Total RNS Isolation Kit Plus Total RNS Purificaiton Kit poliszacharidokban és polifenolokban gazdag növények számára
A készlet leírása:
Katalógusszám RE-05021/05022/05024
Magas poliszacharid és polifenol komponenseket tartalmazó általános növényi minták teljes RNS tisztítására.
Gyorsan extrahálhat kiváló minőségű teljes RNS-t a magas poliszacharid- és polifenoltartalmú növényi mintákból.
RNáz-mentes DNS-tisztító oszlop használatával
Egyszerű – minden művelet szobahőmérsékleten történik
Gyors – a művelet 30 perc alatt befejezhető
Biztonságos – nem használt szerves reagenst 
Műszaki adatok
50 előkészület, 200 előkészület
A készlet a Foregene által kifejlesztett spin oszlopot és formulát használja, amely hatékonyan képes nagy tisztaságú és jó minőségű teljes RNS-t kivonni különböző növényi szövetekből, magas poliszacharid- vagy polifenoltartalommal.Ez biztosítja a DNS-tisztító oszlopot, amely könnyen eltávolítja a genomiális DNS-t a felülúszóból és a szöveti lizátumból.A csak RNS-t tartalmazó oszlop hatékonyan képes megkötni az RNS-t.A készlet egyszerre nagy számú mintát képes feldolgozni.
A teljes rendszer nem tartalmaz RNázt, így a tisztított RNS nem bomlik le.A PRW1 és PRW2 puffer biztosítja, hogy a kapott RNS ne legyen szennyezve fehérjével, DNS-sel, ionokkal és szerves vegyületekkel.
Kit összetevők
| PSL1 puffer, PS puffer, PSL2 puffer |
| PRW1 puffer, PRW2 puffer |
| RNáz-mentes ddH2O, DNS-tisztító oszlop |
| Csak RNS-t tartalmazó oszlop |
Jellemzők és előnyök
■ Működés szobahőmérsékleten (15-25 ℃) a teljes folyamat alatt, jeges fürdő és alacsony hőmérsékletű centrifugálás nélkül.
■ A teljes készlet RNáz-mentes, nem kell aggódnia az RNS lebomlása miatt.
■ Különösen alkalmas poliszacharidok és polifenolok növényi mintáiból származó RNS tisztítására.
■ A DNS-tisztító oszlop specifikusan kötődik a DNS-hez, így a készlet képes eltávolítani a genomi DNS-szennyeződést DNáz hozzáadása nélkül.
■ Magas RNS-hozam: csak RNS-t tartalmazó oszlop és egyedülálló formula hatékonyan tisztítja az RNS-t.
■ Gyors sebesség: könnyen kezelhető, és 30 percen belül befejezhető.
■ Biztonság: nincs szükség szerves reagensre.
■ Kiváló minőség: A tisztított RNS-fragmensek nagy tisztaságúak, fehérjéktől és egyéb szennyeződésektől mentesek, és különféle, későbbi kísérleti alkalmazásoknak is megfelelnek.
A termék paraméterei
■ Downstream alkalmazások: első szálú cDNS szintézis, RT-PCR, molekuláris klónozás, Northern Blot stb.
■ Minta: poliszacharidok és polifenolok friss vagy fagyasztott növényi szövetei
■ Adagolás: 50 mg növényi szövet
■ A tisztító oszlop maximális RNS-kötő kapacitása: 80 μg
■ Elúciós térfogat: 50-200 μl
Kit alkalmazás
Alkalmas magas poliszacharid és polifenol tartalmú friss vagy fagyasztott növényi szövetmintákból (főleg friss növényi levélszövetből) teljes RNS extrakciójára és tisztítására.
Munkafolyamat
Diagram
A Plant Total RNA Isolation Kit Plus 50 mg friss poliszacharid- és polifenollevelet dolgozott fel, és az 5%-os tisztított RNS-t elektroforézissel teszteltük.
1: Banán
2: Ginkgo
3: pamut
4: Gránátalma
Tárolás és eltarthatóság
Ez a készlet 24 hónapig tárolható száraz körülmények között szobahőmérsékleten (15-25 ℃);ha hosszabb ideig kell tárolni, 2-8 ℃ között tárolható.
A PSL1 puffer a β-merkaptoetanol hozzáadása után 4 ℃-ra helyezhető 1 hónapig (a kísérlettel egyidőben javasolt hozzáadni).
Az oszlop eltömődött
Az oszlop lezárása után az RNS-hozam csökken, vagy az RNS tisztítása lehetetlenné válik, és a kapott RNS tömege alacsony.
Gyakori okok elemzése:
1. A minta szünetek nem alaposak.
A mintatörés nem blokkolja teljesen a DNS-TISZTÍTÓ OSZLOPOT, miközben befolyásolja az RNS hozamát és minőségét.Javasoljuk a gyors őrlést elegendő folyékony nitrogénben, amikor a mintákat feltörte. Próbálja meg összetörni a minta sejtfalát, sejtmembránját és egyéb szöveteit.A poliol poliszacharidok növényi mintáihoz javasoljuk a Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS használatát.
2. Ha a leválasztott minta felülúszót DNS-tisztító oszloppal leszívja, a lehetséges sejtfragmentált csapadék belélegezhető.
A felvett sejtfragmentált üledékek a CSAK RNS-oszlopot okozzák, amely blokkolva lesz, amikor az RNS-adszorpciós műveletet végrehajtják (lásd a 6. lépést).Javasoljuk, hogy óvatosan szívja le ezt a felülúszót, hogy elkerülje a sejttörmelék felszívását.
3. A minta kezdeti mennyisége túl sok.
A túlzott mintahasználat a minta tökéletlen fragmentálódását vagy a PSL1 puffer általi nem teljes sejtlízist eredményezi, ami a tisztítóoszlop eltömődését eredményezi a tisztítás során.Plant Total RNS Isolation Kit Minden egyes tisztított műveleti minta 50 mg.A poliol poliszacharidok növényi mintáihoz javasoljuk, hogy próbálja ki a Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS-t.
4. A centrifuga hőmérséklete túl alacsony.
A teljes RNS izolálási és tisztítási folyamatot szobahőmérsékleten (20-25 °C) végezzük°C), kivéve, hogy a mintaszövetet folyékony nitrogén töri meg. Egyes kriogén centrifugák hőmérséklete 20 °C-nál alacsonyabb℃, ami a DNS-tisztító oszlop és/vagy a Csak RNS-oszlop blokkolását okozhatja.Ha ez megtörténik, állítsa a centrifuga hőmérsékletét 20-25 °C-ra℃, ésgyőződjön meg arról, hogy a líziskeveréket és/vagy az etanollal hozzáadott felülúszót előmelegítették 37 °C-ra°C.
Nem extrahált RNS, vagy az RNS-hozam alacsony
Általában sok tényező befolyásolja a visszanyerés hatékonyságát, mint például: minta RNS-tartalma, műveleti módszer, elúciós térfogat stb.
A gyakori okok elemzése az alábbiak szerint:
1.Jégfürdőt vagy alacsony hőmérsékletű (4°C) centrifugálást végeztünk a művelet során.
Javaslat: Szobahőmérsékleten (15-25°C) az egész folyamat során ne végezzen jeges fürdőt és alacsony hőmérsékletű centrifugálást.
2. Az RNS lebomlott a minta nem megfelelő tartósítása vagy a minta hosszú távú tartósítása miatt.
Javaslat: A frissen gyűjtött mintákat gyorsan le kell fagyasztani folyékony nitrogénben, majd hosszú ideig -80°C-on tárolni, kerülni kell a minták ismételt fagyasztását és felolvasztását;vagy azonnal áztassa a mintákat RNS-stabilizátor RNAlater oldatba (állati minták).
3. A minta elégtelen fragmentációja és lízise a tisztítóoszlop eltömődéséhez vezet.
Javaslat: A szövet őrlésekor ügyeljen arra, hogy a szövet megfelelően őrölve legyen, és gyorsan vigye át az előre elkészített PSL1 pufferbe (ellenőrizze, hogy a β-ME megfelelő arányban lett-e hozzáadva, lásd az eljárás 1. lépését).
4. Az eluenst helytelenül adtuk hozzá.
Javaslat: Ügyeljen arra, hogy az RNase-Free ddH2O-t a tisztítóoszlop membránjának közepébe csepegtesse.
5. Nem a megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adták a PSL2 vagy PRW2 pufferhez.
Javaslat: Kérjük, kövesse az utasításokat, adjon megfelelő mennyiségű abszolút etanolt a PSL2 és a PRW2 pufferhez, és jól keverje össze a készlet használata előtt.
6. A szövetminta mennyisége nem megfelelő.
Javaslat: 50 mg szövetet használjon 500 μl PSL1 pufferhez.Túl sok szövet használata csökkenti a kivont RNS mennyiségét, és a kapott RNS tisztasága is csökken.Nyomatékosan javasoljuk, hogy a kezdeti mintaadag ne haladja meg az 50 mg-ot RNS extrakciós műveletenként.
7. Nem megfelelő elúciós térfogat vagy nem teljes elúció.
Javaslat: A tisztító oszlop eluens térfogata 50-200 μl;ha az elúciós hatás nem kielégítő, ajánlatos meghosszabbítani az időt szobahőmérsékleten az előmelegített RNase-Free ddH2O hozzáadása után, például 5-10 perccel.
8. PufferPRW2-vel történő mosás után a tisztító oszlop etanolmaradékot tartalmaz.
Javaslat: Ha az üres csövet 1 percig centrifugálják, és a PRW2 pufferben történő mosás után még maradt etanol, növelheti az üres cső centrifugálásának idejét 2 percre, vagy helyezze a tisztító oszlopot szobahőmérsékleten 5 percre, hogy teljesen eltávolítsa a maradék etanolt.
9. A készletet nem megfelelően használták.
Javaslat: A polifenolos poliszacharidok növényi mintáinál előfordulhat, hogy az olyan általános készletekkel, mint a Plant Total RNA Isolation Kit, nem lehet ideális RNS-mintákat nyerni.Javasoljuk a Plant Total RNA IsolationKit Plus használatát, amelyet kifejezetten polifenol poliszacharid növényi mintákhoz fejlesztettek ki.Kifejezetten polifenol és poliszacharid növényi mintákból RNS kinyerésére kifejlesztett készlet.
Az OD260/OD280 érték alacsony
Az RNS ddH2O-val történő eluálása és a spektrofotométer leolvasásához használt alacsony OD260/OD280 értékeket eredményez.Javasoljuk, hogy 10 mM Tris-HCl-t (pH 7,5) használjon (az RNS eluálására RNáz-mentes ddH2O helyett), hogy viszonylag helyes OD260/OD280 értékeket kapjunk, lásd „RNS-koncentrációs és tisztítási vizsgálatok” a 19. oldalon.
A tisztított RNS lebomlik
A tisztított RNS minősége olyan tényezőktől függ, mint a minta megőrzése, az RNáz szennyeződés és a manipuláció.
A gyakori okok elemzése:
1. A szövetmintákat a gyűjtés után nem tárolták időben.
Javaslat: Ha a szövetmintákat a begyűjtést követően nem használják fel időben, azonnal alacsony hőmérsékleten folyékony nitrogénben tárolják, vagy folyékony nitrogénben történő gyorsfagyasztás után helyezzék át -80°C-ra hosszú távú tárolásra, vagy azonnal merítsék a mintákat RNS-stabilizátor RNAlater oldatba (állati minták).Az RNS-kivonáshoz próbáljon meg frissen gyűjtött szövetmintákat használni.
2. A szövetminták ismételt fagyasztása és felengedése.
Javaslat: A szövetminták tárolása során konzerválás céljából célszerű kis darabokra vágni, felhasználáskor egy részét kiszedni, hogy elkerüljük a minták ismételt fagyasztása és felengedése miatti RNS lebomlását.
3.Az RNase-t bevezetik a műtőbe, vagy nem viselnek eldobható kesztyűt, maszkot stb.
Javaslat: Az RNS-kivonási kísérleteket legjobban külön RNS-műveletekben végezni, és a kísérlet előtt le kell tisztítani a laboratóriumi asztalt, és a kísérlet során eldobható kesztyűt és maszkot kell viselni, hogy az RNáz bejutása által okozott RNS degradációt a lehető legnagyobb mértékben elkerüljük.
4. A reagenst használat közben RNáz szennyezi.
Javaslat: Cserélje ki a növényi teljes RNS extrakciós készletek új sorozatára a kapcsolódó kísérletekhez.
5. Az RNS-manipulációhoz használt centrifugacsövek és pipettahegyek RNázzal szennyezettek.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy az RNS-kivonáshoz használt centrifugacsövek, pipettahegyek, pipetták stb. mind RNáz-mentesek.
Használati útmutatók:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus használati útmutató
