Bukkális tampon/FTA kártya DNS izolációs készlet Genomiális DNS extrakciós vagy tisztító készlet bukkális tamponokból
A készlet leírása:
Gyorsan megtisztíthatja a kiváló minőségű genomikus DNS-t bukkális tampon/FTA-kártya mintákból.
◮Nincs RNáz szennyeződés:A készlethez tartozó Csak DNS-t tartalmazó oszlop lehetővé teszi az RNS eltávolítását a genomi DNS-ből anélkül, hogy a kísérlet során RNázt adnának hozzá, megakadályozva, hogy a laboratórium exogén RNázzal szennyeződjön.
◮Gyors sebesség:A Foregene Protease nagyobb aktivitással rendelkezik, mint a hasonló proteázok, és gyorsan emészti a szövetmintákat;a művelet egyszerű, a genomi DNS extrakció 20-80 percen belül elvégezhető.
◮Kényelmes:A centrifugálást szobahőmérsékleten végezzük, és nincs szükség 4 °C-os alacsony hőmérsékletű centrifugálásra vagy a DNS etanolos kicsapására.
◮Biztonság:Nincs szükség szerves reagens extrakcióra.
◮Jó minőség:A kivont genomiális DNS nagy töredékekkel rendelkezik, nem tartalmaz RNS-t, RNázt és rendkívül alacsony iontartalmat, ami megfelel a különféle kísérletek követelményeinek.
◮Mikroelúciós rendszer:Növelheti a genomiális DNS koncentrációját, ami kényelmes a downstream kimutatáshoz vagy kísérlethez.
Leírás
Ez a készlet hatékony és gyors módszert biztosít a nagy koncentrációjú genomiális DNS kinyerésére bukkális tamponokból és FTA kártyából (vérfoltok).Cégünk igénybevételével'Az egyedülálló, csak DNS-t tartalmazó szilícium-dioxid membrán spin oszlop és formula, Foregene Protease-szal kombinálva, magas koncentrációjú, kiváló minőségű genomiális DNS 80 perc alatt extrahálható.A speciálisan kialakított kis tisztító oszlop megköti a genomiális DNS-t, és a DNS kis mennyiséggel eluálható (15μl) elúciós rendszer a kapott genomiális DNS koncentrációjának növelésére, ami kényelmes a downstream detektáláshoz vagy kísérlethez.A készlet egyszerre egy vagy több mintát tud feldolgozni, és a tisztítási folyamat nem igényel szerves anyagok, például fenol, kloroform extrakcióját, valamint időigényes izopropanolos vagy etanolos kicsapást, a művelet pedig egyszerű és időtakarékos.
Műszaki adatok
50 Előkészületek
Kit összetevők
| ST1 puffer |
| ST2 puffer |
| Lineáris akrilamid |
| Puffer PW |
| Puffer WB |
| EB puffer |
| Foregene Protease |
| Csak DNS-t tartalmazó oszlop |
| Utasítás |
Jellemzők és előnyök
-Nincs RNáz-szennyeződés: A készlethez tartozó Csak DNS-t tartalmazó oszlop lehetővé teszi az RNS eltávolítását a genomi DNS-ből anélkül, hogy a kísérlet során RNázt adnának hozzá, elkerülve, hogy a laboratórium exogén RNázzal szennyeződjön.
-Gyors sebesség: A Foregene Protease nagyobb aktivitással rendelkezik, mint a hasonló proteázok, gyorsan emészti a mintákat;egyszerű művelet.
-Kényelmes: A centrifugálás szobahőmérsékleten történik, és nincs szükség 4°C-os alacsony hőmérsékletű centrifugálásra vagy a DNS etanolos kicsapására.
-Biztonság: nincs szükség szerves reagens extrakcióra.
-Kiváló minőség: A kivont genomiális DNS nagy fragmentumokkal rendelkezik, nincs RNS, nincs RNáz, és rendkívül alacsony az iontartalma, amely megfelel a különféle kísérletek követelményeinek.
-Mikroelúciós rendszer: Növelheti a genomiális DNS koncentrációját, ami kényelmes a downstream detektáláshoz vagy kísérlethez.
Kit alkalmazás
Alkalmas genomikus DNS tisztítására a következő mintákból: bukkális tamponok, FTA Card (vérfoltok).
Tárolás és eltarthatóság
-Ez a készlet 12 hónapig tárolható száraz körülmények között szobahőmérsékleten (15-25°C);ha hosszabb ideig kell tárolni, akkor 2-8°C-on is tárolható.
Megjegyzés: Ha alacsony hőmérsékleten tárolják, az oldat kicsapódásra hajlamos.Használat előtt ügyeljen arra, hogy az oldatot egy ideig szobahőmérsékleten helyezze a készletbe.Ha szükséges, melegítse elő 37°C-os vízfürdőben 10 percig, hogy a csapadék feloldódjon, majd használat előtt keverje össze.
-A Foregene Protease oldat egyedülálló formulával rendelkezik, amely szobahőmérsékleten hosszú ideig (3 hónapig) tárolva aktív;aktivitása és stabilitása 4°C-on tárolva jobb lesz, ezért ajánlott 4°C-on tárolni, ne feledje, hogy -20°C-on ne tárolja.
A tisztító oszlop eltömődött
Ebben a kitben a genomiális DNS extrakciós műveletben a tisztító oszlop közvetlenül adszorbeálódik a minta enzimatikus lízis keverékén, centrifugálási lépés nélkül, és a tisztító oszlop blokkolható lehet a hiányos enzimesítés és a minta magas viszkozitása miatt.
A következő lehetséges okok a következők:
1. Szövetminták nem teljes enzimatikus emésztése.
Javaslat: A Foregene Protease mintafeldolgozási ideje megfelelően meghosszabbítható, vagy a felülúszót 12 000 fordulat/perc (~13 400 × g) 5 perces centrifugálás után vehetjük fel.
2. Szövetminták vagy nagyméretű szövetek túlzott használata.
Javaslat: A legjobb, ha a mintában nem haladja meg az 1 szájüregi tampont;ha a minta túl nagy, akkor ennek megfelelően növelje az ST1 puffer, a Foregene Protease és az ST2 puffer adagját.
3. A minta viszkozitása túl magas.
Javaslat: A mintákat megfelelően hígíthatjuk 10 mM Tris-HCl-lel a genomiális DNS extrakció előtt.
4. A vérkártya töredékeit kiszívták.
Javaslat: A vérfolt (FTA Card) genomi extrakció 6. lépésének átmeneti centrifugálási ideje megfelelően meghosszabbítható.
Alacsony hozam vagy nincs DNS
A genomi DNS-hozamot gyakran számos tényező befolyásolja, beleértve a minta eredetét, a minta tárolási körülményeit, a minta előkészítését, a manipulációt stb.
Az extrakció során nem nyerhető genomi DNS
A lehetséges okok a következők:
1. A minták nem megfelelő tartósítása vagy túl hosszú tárolása genomi DNS lebomlásához vezet.
Javaslat: A szájüregből lehetőleg friss mintát kell venni, és nem tanácsos konzervált mintát használni a genomikus DNS-kivonási műveletekhez;a vérfoltmintáknak biztosítaniuk kell a minőség megfelelőségét, és a tárolási idő sem lehet túl hosszú.
2. A túl kevés szövethasználat azt eredményezheti, hogy a megfelelő genomiális DNS nem válik ki.
Javaslat: Kövesse a kezelési útmutatóban található bukkális tampont mintavételi utasításait, és törölje le annyiszor, amennyit csak lehetséges, hogy elegendő sejtet tudjon rögzíteni a szájpálcikához a genomikus DNS-kinyeréshez;vérfolt minta kinyeréséhez a vérfolt vágási területe megfelelően növelhető.
3. A Foregene Protease nem megfelelően tartósított, ami aktivitásának csökkenését vagy inaktiválását eredményezi.
Javaslat: Erősítse meg a Foregene Protease tárolási feltételeit, vagy cserélje ki új Foregene Protease-re az enzimes reakcióhoz.
4. A készlet nem megfelelő tartósítása vagy a tárolási idő túl hosszú, ami a készlet egyes alkatrészeinek meghibásodását eredményezi.
Javaslat: Vásároljon új bukkális tampon DNS-izoláló készletet a kapcsolódó eljárásokhoz.
5. A WB puffer nem ad hozzá abszolút etanolt.
Javaslat: Győződjön meg arról, hogy a WB puffer megfelelő mennyiségű abszolút etanolt ad hozzá.
6. Az eluens nincs megfelelően hozzáadva a szilikonfilmhez.
Javaslat: Adjon 65 °C-ra előmelegített eluenscseppeket a szilikon membrán közepére, és hagyja szobahőmérsékleten 5 percig az elúció hatékonyságának növelése érdekében.
Alacsony hozamú genomiális DNS izolált
A következő lehetséges okok a következők:
1. A minták nem megfelelő tartósítása vagy túl hosszú tárolása genomi DNS lebomlásához vezet.
Javaslat: A szájüregi tamponokból lehetőleg friss mintát kell venni, és a tartósított tamponokat nem szabad genomikus DNS-kinyeréshez használni.
2. Ha a szövetminta mennyisége túl kicsi, a kivont genomiális DNS-tartalom kisebb lesz.
Javaslat: Kövesse a kezelési útmutatóban található szájüregi tampont mintavételi utasításait, törölje le a lehető legtöbbször, hogy elegendő sejtet tudjon rögzíteni a szájtörlőhöz a genomiális DNS-kinyeréshez.
3. A Foregene Protease nem megfelelően tartósított, ami aktivitásának csökkenését vagy inaktiválását eredményezi.
Javaslat: Erősítse meg a Foregene Protease tárolási feltételeit, vagy cserélje ki új Foregene Protease-re az enzimes reakcióhoz.
4. Eluens problémák.
Javaslat: Használjon EB puffert az elúcióhoz;ha ddH-t használunk2O vagy más eluensek ellenőrizze, hogy az eluátum pH-ja 7,0-8,5 között van.
5. Az eluátum cseppenkénti adagolása nem megfelelő.
Javaslat: Adjon eluenscseppeket a szilikon membrán közepéhez, és hagyja szobahőmérsékleten 5 percig az elúció hatékonyságának növelése érdekében.
6. Az elúciós folyadék túl kevés halmozódik fel.
Javaslat: A genomikus DNS-elúcióhoz használjon eluenst az utasításoknak megfelelően, legalább 15 μl-t.
Az izolált genomiális DNS alacsony tisztaságú
Az alacsony genomiális DNS-tisztaság a downstream kísérletek kudarcához vagy nem kielégítő eredményéhez vezethet, mint például: az enzimek nem vághatók fel, a PCR nem kapja meg a kívánt génfragmenst stb.
A lehetséges okok a következők:
1. Heteroprotein szennyezés, RNS szennyezés.
Elemzés: A tisztító oszlopot nem mostuk PW pufferrel;a Puffer PW mosótisztító oszlopot nem a megfelelő centrifugális sebességgel mostuk.
Javaslat: Az etanol hozzáadása előtt győződjön meg arról, hogy nincs csapadék a felülúszóban;ügyeljen arra, hogy a tisztító oszlopot az utasítások szerint mossa ki, és ez a lépés nem hagyható ki.
2. Szennyező ion szennyezés.
Elemzés: A puffer WB mosótisztító oszlopot kihagytuk, vagy csak egyszer mostuk, ami maradék ionos szennyeződést eredményezett.
Javaslat: Ügyeljen arra, hogy a Buffer WB-t kétszer mossa meg az utasításoknak megfelelően, hogy a lehető legnagyobb mértékben eltávolítsa a maradék ionokat.
3. RNS enzim szennyeződés.
Elemzés: Idegen RNázokat adtunk a pufferhez;A puffer PW mosási művelete helytelen volt, ami RNáz maradékokat eredményezett, amelyek befolyásolták a downstream RNS kísérleti műveleteket, például az in vitro transzkripciót.
Javaslat: A Foregene sorozatú nukleinsav-izolációs készletek további RNáz hozzáadása nélkül is eltávolíthatják az RNS-t, így a bukkális tampon/FTA-kártya DNS-izolációs készlethez nem kell RNázt hozzáadni;feltétlenül kövesse a Puffer PW mosótisztító oszlopra vonatkozó utasításokat, és ez a lépés nem hagyható ki.
4. Etanol maradék.
Elemzés: A WB puffer nem végzett üres cső centrifugálást a tisztító oszlop mosása után.
Javaslat: Végezze el a megfelelő üres cső centrifugálási műveletet az utasításoknak megfelelően.
5. Egyéb szennyeződések.
Elemzés: A mentett minták vagy a speciális minták nem kerülnek előkezelésre.
Javaslat: Alaposan előkezelje a mintát az utasításoknak megfelelően.
