Nincsenek erősítő jelek

1.A készletben lévő Taq DNS polimeráz elveszti aktivitását a készlet nem megfelelő tárolása vagy lejárata miatt.
Javaslat: Ellenőrizze a készlet tárolási feltételeit;adjon újra megfelelő mennyiségű Taq DNS polimerázt a PCR rendszerhez, vagy vásároljon egy új valós idejű PCR készletet a kapcsolódó kísérletekhez.

2. A DNS-templátban sok a Taq DNS-polimeráz inhibitora.
Javaslat: Tisztítsa meg újra a sablont, vagy csökkentse a felhasznált sablon mennyiségét.

3. A Mg2+ koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: Az általunk biztosított 2× Real PCR Mix Mg2+ koncentrációja 3,5 mM.Egyes speciális primerek és templátok esetében azonban az Mg2+ koncentráció magasabb lehet.Ezért közvetlenül hozzáadhat MgCl2-t az Mg2+-koncentráció optimalizálásához.Javasoljuk, hogy minden alkalommal növelje a Mg2+ 0,5 mM-t az optimalizálás érdekében.

4. A PCR amplifikációs körülmények nem megfelelőek, és a primer szekvencia vagy koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: ellenőrizze a primer szekvencia helyességét, és a primer nem romlott le;Ha az erősítési jel nem jó, próbálja meg csökkenteni a lágyítási hőmérsékletet, és megfelelően állítsa be a primer koncentrációját.

5. A sablon mennyisége túl kevés vagy túl sok.
Javaslat: Végezzen templát linearizációs gradiens hígítást, és válassza ki a legjobb PCR hatású templát koncentrációt a valós idejű PCR kísérlethez.

Az NTC fluoreszcencia értéke túl magas

1. Működés közben okozott reagens szennyeződés.
Javaslat: Cserélje ki új reagensekkel a valós idejű PCR-kísérletekhez.

2. A PCR reakciórendszer előkészítése során szennyeződés történt.
Javaslat: Tegye meg a szükséges óvintézkedéseket működés közben, mint például: viseljen latex kesztyűt, használjon szűrős pipettahegyet stb.

3. A primerek lebomlanak, és a primerek lebomlása nem specifikus amplifikációt okoz.
Javaslat: Használjon SDS-PAGE elektroforézist annak kimutatására, hogy a primerek lebomlanak-e, és cserélje ki őket új primerekre a valós idejű PCR-kísérletekhez.

Primer dimer vagy nem specifikus amplifikáció

1. A Mg2+ koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: Az általunk biztosított 2× Real PCR EasyTM Mix Mg2+ koncentrációja 3,5 mM.Egyes speciális primerek és templátok esetében azonban az Mg2+ koncentráció magasabb lehet.Ezért közvetlenül hozzáadhat MgCl2-t az Mg2+-koncentráció optimalizálásához.Javasoljuk, hogy minden alkalommal növelje a Mg2+ 0,5 mM-t az optimalizálás érdekében.

2. A PCR hőkezelési hőmérséklete túl alacsony.
Javaslat: Növelje minden alkalommal 1 °C-kal vagy 2 °C-kal a PCR lágyítási hőmérsékletét.

3. A PCR termék túl hosszú.
Javaslat: A Real Time PCR termék hossza 100-150 bp között legyen, legfeljebb 500 bp.

4. A primerek lebomlanak, és a primerek lebomlása specifikus amplifikáció megjelenéséhez vezet.
Javaslat: Használjon SDS-PAGE elektroforézist annak kimutatására, hogy a primerek lebomlanak-e, és cserélje ki őket új primerekre a valós idejű PCR-kísérletekhez.

5. A PCR rendszer nem megfelelő, vagy a rendszer túl kicsi.
Javaslat: A PCR reakciórendszer túl kicsi, ezért a detektálási pontosság csökken.A legjobb, ha a kvantitatív PCR-műszer által javasolt reakciórendszert használja a valós idejű PCR-kísérlet ismételt futtatásához.

A mennyiségi értékek rossz ismételhetősége

1.A műszer hibásan működik.
Javaslat: A műszer egyes PCR-nyílásai között hibák lehetnek, amelyek rossz reprodukálhatóságot eredményeznek a hőmérséklet-szabályozás vagy a detektálás során.Kérjük, ellenőrizze a megfelelő műszer utasításai szerint.

2. A minta tisztasága nem megfelelő.
Javaslat: A szennyezett minták a kísérlet rossz reprodukálhatóságához vezetnek, beleértve a templát és a primerek tisztaságát.A legjobb a templát újratisztítása, és a primereket SDS-PAGE-val lehet a legjobban tisztítani.

3. A PCR rendszer előkészítési és tárolási ideje túl hosszú.
Javaslat: Használja a Real Time PCR rendszert a PCR kísérlethez közvetlenül az előkészítés után, és ne hagyja túl sokáig.

4. A PCR amplifikációs körülmények nem megfelelőek, és a primer szekvencia vagy koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: ellenőrizze a primer szekvencia helyességét, és a primer nem romlott le;Ha az erősítési jel nem jó, próbálja meg csökkenteni a lágyítási hőmérsékletet, és megfelelően állítsa be a primer koncentrációját.

5. A PCR rendszer nem megfelelő, vagy a rendszer túl kicsi.
Javaslat: A PCR reakciórendszer túl kicsi, ezért a detektálási pontosság csökken.A legjobb, ha a kvantitatív PCR-műszer által javasolt reakciórendszert használja a valós idejű PCR-kísérlet ismételt futtatásához.