Problémaelemzési útmutató

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Alacsony hozam vagy nincs DNS

Általában sok tényező befolyásolja a genomiális DNS hozamát, beleértve a minta forrását, a minta korát, a minta tárolási körülményeit és a műveletet.

Az extrakció során nem lehetett genomi DNS-t nyerni

1. A szövetmintákat nem megfelelően vagy túl sokáig tárolják, ami a genomiális DNS lebomlásához vezet.

Javaslat: A szövetmintákat folyékony nitrogénben vagy -20 °C-on tárolja°C;próbáljon meg újonnan gyűjtött mintákat használni a genomiális DNS-kivonáshoz.

2. Túl kevés minta esetén előfordulhat, hogy a megfelelő genomiális DNS-t nem lehet kivonni.

Javaslat: A hosszú ideig tárolt vagy súlyos genomiális DNS-lebomlást mutató szövetminták esetében a szövetminták mennyisége megfelelően növelhető jelentős genomi DNS kinyerése érdekében.A minta mennyisége a DNS-igény szerint meghatározható, de a friss minta ne haladja meg a 100 mg-ot, a száraz minta pedig a 30 mg-ot.

3. A mintát nem őrlik folyékony nitrogénnel, vagy nem helyezték túl sokáig a folyékony nitrogén után.

Javaslat: A DNS-kivonás során a mintát teljesen le kell őrölni folyékony nitrogénnel, hogy megtörjük a sejtfalat;darálás után kérjük, helyezze át a mintaport a 65 °C-ra előmelegített PL1-be°C a lehető leghamarabb (miután az őrölt por megolvad, a genomi DNS gyorsan lebomlik) .

4. A Foregene Protease nem megfelelő tárolása csökkent vagy inaktivált aktivitást eredményez.

Javaslat: Erősítse meg a Foregene Protease tárolási feltételeit, vagy cserélje ki egy új Foregene Protease-re az enzimatikus hidrolízishez.

5. A készletet nem megfelelően vagy túl sokáig tárolták, ami a készlet egyes alkatrészeinek meghibásodását okozza.

Javaslat: Vásároljon új növényi genomikus DNS-kivonó készletet a kapcsolódó műveletekhez.

6. A készlet nem megfelelő használata.

Javaslat: Vásároljon növényi DNS izolációs készletet, amely a növényi genomi DNS extrakciójához és tisztításához készült mintákhoz készült.

7. Puffer WB hozzáadása nélkül avízmentes etanol.

Javaslat: Ügyeljen arra, hogy a megfelelő mennyiségű abszolút etanolt adjon a Puffer WB-hez.

8. Az eluenst nem megfelelően csepegtette a szilícium-dioxid membránra.

Javaslat: Adja hozzá az előmelegített eluenst 65 °C-on℃cseppenként a szilikagél membrán közepére, és hagyjuk szobahőmérsékleten 5 percig az elúciós hatékonyság növelése érdekében.

Kivonás alacsony hozamú genomiális DNS előállításához

1. A mintát nem megfelelően vagy túl sokáig tárolják, ami a genomiális DNS lebomlásához vezet.

Javaslat: Tárolja a szövetmintákat -20 °C-on℃;próbáljon meg újonnan gyűjtött szövetmintákat használni a genomiális DNS-kivonáshoz.

2. Ha a szövetminták mennyisége túl kicsi, a kivont genomiális DNS kevesebb lesz.

Javaslat: Egyes növényi minták vízben gazdagok, pl. vízinövények, pl. algák, stb., az adagolás megfelelően növelhető, vagy a víz egy kicsit dehidratálható a műtét előtt.

3. A mintákat nem őrölték meg alaposan folyékony nitrogénnel, vagy az őrlés után túl sokáig szobahőmérsékleten hagyták őket.

Javaslat: A folyékony nitrogén őrlésnek elegendőnek kell lennie, és a minta sejtfalát lehetőleg meg kell törni;közvetlenül az őrlés után a mintaport át kell vinni a 65-ösre℃előmelegített PL1 puffert a következő lépéshez.

4. Nem a megfelelő készletet használja.

Javaslat: Használjon erre a célra szolgáló növényi DNS izolációs készletet a növényi genomi DNS kivonásához és tisztításához.

5. A Foregene Protease nem megfelelő tárolása csökkent vagy inaktivált aktivitást eredményez.

Javaslat: Erősítse meg a Foregene Protease tárolási feltételeit, vagy cserélje ki egy új Foregene Protease-re az enzimatikus hidrolízishez.

6. Eluens probléma

Javaslat: Használjon EB puffert az elúcióhoz;ha ddH-t használunk₂O vagy más eluens, győződjön meg arról, hogy az eluens pH-ja 7,0-8,5 között van.

7. Az eluens nem csöpögött megfelelően

Javaslat: Adja hozzá az eluáló cseppet a szilícium-dioxid membrán közepéhez, és hagyja szobahőmérsékleten 5 percig az elúció hatékonyságának növelése érdekében.

8. Az eluens térfogata túl kicsi

Javaslat: Kérjük, használja az eluenst a genomikus DNS-elúcióhoz az utasításoknak megfelelően, legalább 100μl.

Kivont genomiális DNS alacsony tisztasággal

A genomiális DNS alacsony tisztasága a downstream kísérletek kudarcához vagy gyenge hatásához vezet, például: az enzim nem vágható, és a célgén fragmentum nem nyerhető ki PCR-rel.

1. Különféle fehérje szennyeződés, RNS szennyeződés.

Elemzés: PW puffert nem használtunk az oszlop mosására;PW puffert nem használtunk az oszlop megfelelő centrifugálási sebességgel történő mosására.

Javaslat: próbálja meg biztosítani, hogy a felülúszóban ne legyen csapadék, amikor a felülúszót átengedik az oszlopon;ügyeljen arra, hogy a tisztító oszlopot PW pufferrel mossuk az utasításoknak megfelelően, és ez a lépés nem hagyható ki.

2. Szennyező ion szennyezés.

Elemzés: A Puffer WB mosóoszlopot kihagytuk, vagy csak egyszer mostuk, ami maradék ionos szennyeződést eredményezett.

Javaslat: Ügyeljen arra, hogy kétszer mossa le a Buffer WB-vel az utasításoknak megfelelően, hogy a lehető legnagyobb mértékben eltávolítsa a maradék ionokat.

3. RNáz szennyeződés.

Elemzés: Exogén RNázt adunk a pufferhez;a Puffer PW helytelen mosási művelete maradék RNázt eredményez, és befolyásolja a downstream RNS kísérleti műveleteket, például az in vitro transzkripciót.

Javaslat: A Foregene sorozatú nukleinsav extrakciós készletek további RNáz nélkül is eltávolíthatják az RNS-t, és a Plant DNA Isolation Kitben lévő összes reagenshez nincs szükség RNázra;ügyeljen arra, hogy a tisztító oszlopot PW pufferrel mossuk az utasításoknak megfelelően, és ez a lépés nem hagyható el.

4. Etanol maradványok.

Elemzés: Miután a tisztító oszlopot WB pufferrel mostuk, üres cső centrifugálást nem végeztünk.

Javaslat: Kövesse az utasításokat a megfelelő üres cső centrifugálásához.

Használati utasítás:

Növényi DNS izolációs készlet használati útmutatója