Valós idejű PCR Easyᵀᴹ-Taqman
A készlet leírása:
◮Egyszerű – 2× PCR Mix a kísérleti hibák és a működési idő csökkentése érdekében
◮A specifikus – optimalizált puffer és a hot-start Taq enzim megakadályozhatja a nem specifikus amplifikációt és a primer dimer képződését
◮Nagy érzékenység – érzékeli a sablon alacsony példányszámát
◮Jó sokoldalúság – kompatibilis a legtöbb valós idejű kvantitatív PCR műszerrel
Kit Leírások
A 2X Real PCR EasyTMA Real Time PCR Easy által biztosított Mix-TaqmanTM- A Taqman kit egy új premix rendszer, amely specifikus fluoreszcens próbákat használ a valós idejű PCR amplifikációs reakciókhoz, ami nagymértékben javíthatja a termék specifitását és reakcióérzékenységét.A ROX belső kontrollfestékként kerül forgalomba.
2X Real PCR EasyTMA Mix-Taqman a Foregene egyedülálló hot-start Taq DNS-polimerázát tartalmazza.A közönséges Taq enzimekhez képest előnye a magas amplifikációs hatékonyság, az erős specifikus amplifikációs képesség és az alacsony eltérési arány.Csökkentheti a nem specifikus amplifikációt és javíthatja a PCR pontosságát.
Műszaki adatok
| Valós idejű PCR egyszerűTM-Taqman | ||||
| Kit összetétel (20μl rendszer) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2×Valódi PCRKönnyenTMKeverd össze-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
| 20×ROX referenciafesték | 200 μl | 0.5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
| DNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
| Iutasítás | 1 | 1 | 1 | 1 |
Jellemzők és előnyök
■ Egyszerű – 2X PCR Mix a kísérleti hibák és a működési idő csökkentése érdekében
■ A specifikus – optimalizált puffer és a hot-start Taq enzim megakadályozhatja a nem specifikus amplifikációt és a primer dimer képződését
■ Nagy érzékenység – érzékeli a sablon alacsony példányszámát
■ Jó sokoldalúság – kompatibilis a legtöbb valós idejű kvantitatív PCR műszerrel
Kit alkalmazás
qPCR elemzés
Munkafolyamat
Grafikus
Tárolás és eltarthatóság
Ezt a készletet fénytől védve és -20 ℃-on kell tárolni.Gyakori használat esetén 4°C-on is tárolható rövid ideig (10 napig).
Nincsenek erősítő jelek
1.A készletben lévő Taq DNS polimeráz elveszti aktivitását a készlet nem megfelelő tárolása vagy lejárata miatt.
Javaslat: Ellenőrizze a készlet tárolási feltételeit;adjon újra megfelelő mennyiségű Taq DNS polimerázt a PCR rendszerhez, vagy vásároljon egy új valós idejű PCR készletet a kapcsolódó kísérletekhez.
2. A DNS-templátban sok a Taq DNS-polimeráz inhibitora.
Javaslat: Tisztítsa meg újra a sablont, vagy csökkentse a felhasznált sablon mennyiségét.
3. A Mg2+ koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: Az általunk biztosított 2× Real PCR Mix Mg2+ koncentrációja 3,5 mM.Egyes speciális primerek és templátok esetében azonban az Mg2+ koncentráció magasabb lehet.Ezért közvetlenül hozzáadhat MgCl2-t az Mg2+-koncentráció optimalizálásához.Javasoljuk, hogy minden alkalommal növelje a Mg2+ 0,5 mM-t az optimalizálás érdekében.
4. A PCR amplifikációs körülmények nem megfelelőek, és a primer szekvencia vagy koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: ellenőrizze a primer szekvencia helyességét, és a primer nem romlott le;Ha az erősítési jel nem jó, próbálja meg csökkenteni a lágyítási hőmérsékletet, és megfelelően állítsa be a primer koncentrációját.
5. A sablon mennyisége túl kevés vagy túl sok.
Javaslat: Végezzen templát linearizációs gradiens hígítást, és válassza ki a legjobb PCR hatású templát koncentrációt a valós idejű PCR kísérlethez.
Az NTC fluoreszcencia értéke túl magas
1. Működés közben okozott reagens szennyeződés.
Javaslat: Cserélje ki új reagensekkel a valós idejű PCR-kísérletekhez.
2. A PCR reakciórendszer előkészítése során szennyeződés történt.
Javaslat: Tegye meg a szükséges óvintézkedéseket működés közben, mint például: viseljen latex kesztyűt, használjon szűrős pipettahegyet stb.
3. A primerek lebomlanak, és a primerek lebomlása nem specifikus amplifikációt okoz.
Javaslat: Használjon SDS-PAGE elektroforézist annak kimutatására, hogy a primerek lebomlanak-e, és cserélje ki őket új primerekre a valós idejű PCR-kísérletekhez.
Primer dimer vagy nem specifikus amplifikáció
1. A Mg2+ koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: Az általunk biztosított 2× Real PCR EasyTM Mix Mg2+ koncentrációja 3,5 mM.Egyes speciális primerek és templátok esetében azonban az Mg2+ koncentráció magasabb lehet.Ezért közvetlenül hozzáadhat MgCl2-t az Mg2+-koncentráció optimalizálásához.Javasoljuk, hogy minden alkalommal növelje a Mg2+ 0,5 mM-t az optimalizálás érdekében.
2. A PCR hőkezelési hőmérséklete túl alacsony.
Javaslat: Növelje minden alkalommal 1 °C-kal vagy 2 °C-kal a PCR lágyítási hőmérsékletét.
3. A PCR termék túl hosszú.
Javaslat: A Real Time PCR termék hossza 100-150 bp között legyen, legfeljebb 500 bp.
4. A primerek lebomlanak, és a primerek lebomlása specifikus amplifikáció megjelenéséhez vezet.
Javaslat: Használjon SDS-PAGE elektroforézist annak kimutatására, hogy a primerek lebomlanak-e, és cserélje ki őket új primerekre a valós idejű PCR-kísérletekhez.
5. A PCR rendszer nem megfelelő, vagy a rendszer túl kicsi.
Javaslat: A PCR reakciórendszer túl kicsi, ezért a detektálási pontosság csökken.A legjobb, ha a kvantitatív PCR-műszer által javasolt reakciórendszert használja a valós idejű PCR-kísérlet ismételt futtatásához.
A mennyiségi értékek rossz ismételhetősége
1.A műszer hibásan működik.
Javaslat: A műszer egyes PCR-nyílásai között hibák lehetnek, amelyek rossz reprodukálhatóságot eredményeznek a hőmérséklet-szabályozás vagy a detektálás során.Kérjük, ellenőrizze a megfelelő műszer utasításai szerint.
2. A minta tisztasága nem megfelelő.
Javaslat: A szennyezett minták a kísérlet rossz reprodukálhatóságához vezetnek, beleértve a templát és a primerek tisztaságát.A legjobb a templát újratisztítása, és a primereket SDS-PAGE-val lehet a legjobban tisztítani.
3. A PCR rendszer előkészítési és tárolási ideje túl hosszú.
Javaslat: Használja a Real Time PCR rendszert a PCR kísérlethez közvetlenül az előkészítés után, és ne hagyja túl sokáig.
4. A PCR amplifikációs körülmények nem megfelelőek, és a primer szekvencia vagy koncentráció nem megfelelő.
Javaslat: ellenőrizze a primer szekvencia helyességét, és a primer nem romlott le;Ha az erősítési jel nem jó, próbálja meg csökkenteni a lágyítási hőmérsékletet, és megfelelően állítsa be a primer koncentrációját.
5. A PCR rendszer nem megfelelő, vagy a rendszer túl kicsi.
Javaslat: A PCR reakciórendszer túl kicsi, ezért a detektálási pontosság csökken.A legjobb, ha a kvantitatív PCR-műszer által javasolt reakciórendszert használja a valós idejű PCR-kísérlet ismételt futtatásához.
-
Animal Tissue Direct PCR készlet (mintavétel nélkül...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (minta nélkül...
-
Állati szövet DNS izolációs készlet DNS extrakció ...
-
Animal Total RNA Isolation Kit Total RNS Extrac...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation...
-
General Plasmid Mini Kit General Plasmid DNS Ex...
