(96-lyukú) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR készlet – SYBR Green I
Leírások
A(96-os) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR készlet–SYBR Green Ibiztosítjaegyedülálló lízispuffer rendszerto gyorsan felszabadítja az RNS-ttenyésztett sejtbőlminták az RT-qPCR reakciókhoz, kiküszöbölve az idő- és munkaigényeseketRNS tisztítási folyamat, és mindössze 7 percet vesz igénybe a szükséges RNS-templát beszerzése.A5× Direct RT Mixés2× Direct qPCR Mix-SYBRa dobozban biztosított gyorsan éshatékonyan szerezze be a valós idejű mennyiségi adatokatPCR eredmények.
Az 5× Direct RT Mix és a 2× Direct qPCR Mix-SYBR erős inhibitor toleranciával rendelkezik, és a vizsgálandó minta lizátumát templátként használhatja a hatékony reverz transzkripció és specifikus amplifikáció érdekében.A reagens egyedi Foregene reverz transzkriptázt tartalmaz, amely nagy affinitással rendelkezik az RNS-hez, valamint Hot D-Taq DNS polimerázt, dNTP-ket, MgCl-t.2 , reakciópuffer, PCR optimalizáló és stabilizátor, és a lízispufferrel együtt használható a minta gyors, egyszerű és pontos kimutatására, valamint nagy érzékenység, erős specificitás és jó stabilitás jellemzi.
A készlet 96 lyukú tenyésztett sejtek mikrorendszeri lízisét célozza, és jó egyenletességgel és konzisztenciával rendelkezik;A kit komponensei 96 lízis reakciót, 96 reverz transzkripciós reakciót és 96 × 2 qPCR reakciót biztosítanak, amelyek egyszeri használatra alkalmasak a 96 lyukú sejtlemezre, elkerülve a reagensek ismételt felnyitása, fagyasztása és felengedése által okozott szennyeződést, valamint a reagens teljesítményének romlását.
Kit összetevők
| Kit összetétel ( 50 μL lízis rendszer/20 μLRT reakciórendszer /20μL qPCR reakciórendszer) | DRT-03011 | Megjegyzés | |
| 96T | |||
| RészI | PufferCL | 5 ml | SejtLysis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| PufferST | 500 μL | ||
| Rész II | DNSRadír | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Közvetlen qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX referenciafesték | 400µl | ||
| RNáz- IngyenesddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Méves | 1 darab | 1 adag | |
*: A DNS Eraser lízisreagens a kit II. részében található;A Cell Lysis, RT és qPCR komponensek külön megvásárolhatók.
Jellemzők és előnyök
■Egyszerű és hatékony: a Cell Direct RT technológiával mindössze 7 perc alatt RNS-mintákat lehet venni.
■ A mintaigény kicsi, akár 10 cella is tesztelhető.
■ Nagy áteresztőképesség: gyorsan képes kimutatni az RNS-t a 384, 96, 24, 12, 6 lyukú lemezeken tenyésztett sejtekben.
■ A DNS Eraser gyorsan eltávolíthatja a felszabaduló genomokat, nagymértékben csökkentve a későbbi kísérleti eredményekre gyakorolt hatást.
■ Az optimalizált RT és qPCR rendszer a kétlépcsős RT-PCR reverz transzkripciót hatékonyabbá, a PCR-t specifikusabbá és az RT-qPCR reakciógátlókkal szemben ellenállóbbá teszi.
Kit alkalmazás
Alkalmazási terület: tenyésztett sejtek.
- Mintalízissel felszabaduló RNS: csak a kit RT-qPCR templátjára alkalmazható.
- A készlet a következő célokra használható: génexpressziós elemzés, siRNS-mediált géncsendesítő hatás ellenőrzése, gyógyszerszűrés stb.
Tárolás és eltarthatóság
A készlet I. részét 4 helyen kell tárolni℃;A II. részt -20 ℃-on kell tárolni.
A Foregene Protease Plus II-t 4 °C-on kell tárolni℃, ne fagyassza le -20 ℃-on.
2. reagens×A közvetlen qPCR Mix-Taqman-t -20 °C-on kell tárolni℃sötétben;gyakori használat esetén 4-en is tárolható℃ rövid távú tároláshoz (10 napon belül felhasználható).
Valós idejű PCR primer tervezési elvek
Forward Primer és Reverse Primer
A valós idejű PCR-nél a primer tervezése nagyon fontos.A primerek a PCR-amplifikáció specifitásához és hatékonyságához kapcsolódnak, és a következő elvek alapján tervezhetők:
- Alapozó hossza: 18-30 bp.
- GC tartalom: 40-60%.
- Tm érték: Primer tervező szoftver, mint például a Primer 5, meg tudja adni az alapozó Tm értékét.Az upstream és a downstream primerek Tm értékeinek a lehető legközelebb kell lenniük.A Tm számítási képlet is használható: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).A PCR végrehajtásakor általában az 5 °C-os primer Tm értéke alatti hőmérsékletet választjuk annealing hőmérsékletként (az összekeverési hőmérséklet megfelelő emelkedése növelheti a PCR reakció specificitását).
- Primerek és PCR termékek:
- A tervezési primer PCR amplifikációs termék hossza előnyösen 100-150 bp.
- A sablon másodlagos szerkezeti területén a tervezési alapozókat lehetőleg kerülni kell.
- Kerülje el 2 vagy több komplementer bázis képződését az upstream és downstream primerek 3'-végei között.
- A Primer 3′ csatlakozóaljzata nem lehet jelen további 3 egymást követő G-vel vagy C-vel.
- Maguknak a primereknek nem lehet komplementer szerkezetük, különben hajtűszerkezet képződik, ami befolyásolja a PCR-amplifikációt.
- Az ATCG-t a lehető legegyenletesebben kell elosztani a primerszekvenciában, és a 3'-terminális bázist kerülni kell T-ként.
Függelék1:Cell KözvetlenRT-qPCR Kit összetevőt kiegészítő csomag
1. Sejtlízis oldat
| Sejtlízis oldat | |||
| Kit összetevők (24-lyukú lízis rendszer / lyuk) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Részén | CL puffer | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| RészII | DNS radír | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit összetevők (20 μl reakciórendszer) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR keverék | ||
| Kit összetevők (20 μl reakciórendszer) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referenciafesték | 40 μl | 200 μl |
| RNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Használati útmutatók:
