Cell Direct RT qPCR készlet – Taqman közvetlen sejtlízis sejtkész, egylépéses qRT-PCR készletek szonda
Leírások
Ez a termék egyedülálló lízispufferrendszert használ az RNS gyors felszabadítására a tenyésztett sejtmintákból az RT-qPCR reakciókhoz, kiküszöbölve az időigényes és fáradságos RNS-tisztítási folyamatot, és mindössze 7 percet vesz igénybe a szükséges RNS-templát beszerzéséhez.
Az 5× Direct RT Mix és a 2× Direct qPCR Mix-Taqman erős inhibitor toleranciával rendelkezik, és hatékony visszafordítást és specifikus amplifikációt tud végrehajtani a mérendő minta lizátumának templátként való felhasználásával.A reagens Foregene reverz transzkriptázt, Hot D-Taq DNS polimerázt, dNTP-ket, MgCl-t tartalmaz2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, amelyek a lízis pufferrel együtt használhatók a minták gyors és egyszerű detektálására, és amelyek jellemzői a nagy érzékenység, specificitás és stabilitás.
Műszaki adatok
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit összetevők
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit összetevők 20μl qPCR reakciórendszer | DRT-01021 | DRT-01022 | jegyzet | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Rész I | CL puffer | 4 ml | 20 ml | Sejtlízis |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Puffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Rész II | DNS radír | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix* | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× közvetlen qPCR Mix-Taqman* | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX referenciafesték | 40 μl | 200 μl | ||
| RNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Használati utasítás | 1 darab | 1 darab | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman külön megvásárolható
Jellemzők és előnyök
■Egyszerű és hatékony: a Cell Direct RT technológiával mindössze 7 perc alatt RNS-mintákat lehet venni.
■ A mintaigény kicsi, akár 10 cella is tesztelhető.
■ Nagy áteresztőképesség: gyorsan képes kimutatni az RNS-t a 384, 96, 24, 12, 6 lyukú lemezeken tenyésztett sejtekben.
■ A DNS Eraser gyorsan eltávolíthatja a felszabaduló genomokat, nagymértékben csökkentve a későbbi kísérleti eredményekre gyakorolt hatást.
■ Az optimalizált RT és qPCR rendszer a kétlépcsős RT-PCR reverz transzkripciót hatékonyabbá, a PCR-t specifikusabbá és az RT-qPCR reakciógátlókkal szemben ellenállóbbá teszi.
Kit alkalmazás
Alkalmazási terület: tenyésztett sejtek.
- Mintalízissel felszabaduló RNS: csak a kit RT-qPCR templátjára alkalmazható.
- A készlet a következő célokra használható: génexpressziós elemzés, siRNS-mediált géncsendesítő hatás ellenőrzése, gyógyszerszűrés stb.
Tárolás és eltarthatóság
A készlet I. részét 4 helyen kell tárolni℃;A II. részt -20 ℃-on kell tárolni.
A Foregene Protease Plus II-t 4 °C-on kell tárolni℃, ne fagyassza le -20 ℃-on.
2. reagens×A közvetlen qPCR Mix-Taqman-t -20 °C-on kell tárolni℃sötétben;gyakori használat esetén 4-en is tárolható℃ rövid távú tároláshoz (10 napon belül felhasználható).
Valós idejű PCR primer tervezési elvek
Forward Primer és Reverse Primer
A valós idejű PCR-nél a primer tervezése nagyon fontos.A primerek a PCR-amplifikáció specifitásához és hatékonyságához kapcsolódnak, és a következő elvek alapján tervezhetők:
- Alapozó hossza: 18-30 bp.
- GC tartalom: 40-60%.
- Tm érték: Primer tervező szoftver, mint például a Primer 5, meg tudja adni az alapozó Tm értékét.Az upstream és a downstream primerek Tm értékeinek a lehető legközelebb kell lenniük.A Tm számítási képlet is használható: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).A PCR végrehajtásakor általában az 5 °C-os primer Tm értéke alatti hőmérsékletet választjuk annealing hőmérsékletként (az összekeverési hőmérséklet megfelelő emelkedése növelheti a PCR reakció specificitását).
- Primerek és PCR termékek:
- A tervezési primer PCR amplifikációs termék hossza előnyösen 100-150 bp.
- A sablon másodlagos szerkezeti területén a tervezési alapozókat lehetőleg kerülni kell.
- Kerülje el 2 vagy több komplementer bázis képződését az upstream és downstream primerek 3'-végei között.
- A Primer 3′ csatlakozóaljzata nem lehet jelen további 3 egymást követő G-vel vagy C-vel.
- Maguknak a primereknek nem lehet komplementer szerkezetük, különben hajtűszerkezet képződik, ami befolyásolja a PCR-amplifikációt.
- Az ATCG-t a lehető legegyenletesebben kell elosztani a primerszekvenciában, és a 3'-terminális bázist kerülni kell T-ként.
Függelék1:Cell KözvetlenRT-qPCR Kit összetevőt kiegészítő csomag
1. Sejtlízis oldat
| Sejtlízis oldat | |||
| Kit összetevők (24-lyukú lízis rendszer / lyuk) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Részén | CL puffer | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| RészII | DNS radír | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit összetevők (20 μl reakciórendszer) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR keverék | ||
| Kit összetevők (20 μl reakciórendszer) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referenciafesték | 40 μl | 200 μl |
| RNáz-mentes ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Használati útmutatók:
