Közvetlen RT-qPCR Kit II
A készlet leírása:
◮A Foregene által kifejlesztett Foreasy Reverse Transcriptase-t és Foreasy HS Taq DNS-polimerázt használó közvetlen RT-qPCR Kit egyedi reakciópufferrel erős ellenállást és kompatibilitást biztosít, és közvetlenül tesztelheti a reakciót a Foregene Lysis rendszer sablonként történő használatával.Ez a készlet alkalmazható COVID-19 nukleinsav-detektáló készlet és más patogén baktériumok nukleinsav-detektáló készletének fejlesztésére.
Leírás
A közvetlen RT-qPCR készlet külön csomagolt RT-qPCR puffert, nagy hatékonyságú Foreasy HS Taq DNS polimerázt tartalmazés a Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),kényelmessé teszi a háttérkészletek létrehozását és a rendszer beállítását, egyszerű ellenőrzésen belül.
A Foregene által kifejlesztett Foreasy Reverse Transcriptase-t és Foreasy HS Taq DNS-polimerázt használó közvetlen RT-qPCR Kit egyedi reakciópufferrel erős ellenállást és kompatibilitást biztosít, és közvetlenül tesztelheti a reakciót a Foregene Lysis rendszer sablonként történő használatával.Ez a készlet alkalmazható COVID-19 nukleinsav-detektáló készlet és más patogén baktériumok nukleinsav-detektáló készletének fejlesztésére.
Ez a készlet közvetlenül az IVD termék összetevője lehet, könnyen és gyorsan használható.Csak egyszerű ellenőrzésre van szüksége, újbóli fejlesztés nélkül.
Műszaki adatok
500 tonna, 50 000 tonna
Kit összetevők
| A készlet tartalma (20 μL reakciórendszer) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Reverse transzkriptáz (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNS polimeráz (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2× közvetlen RT-qPCRPuffer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Utasítás | 1 | 1 |
Működési lépések
V: Készítse elő a sablont és a reagenst
1. Készítse elő az előkészített RNS-templátot (Az RNS-templát extrahálásához és tisztításához a Foregene Total RNA Isolation Kit sorozat készletét javasoljuk) vagy a minta krakkolási terméket (ajánlott a Foregene Lysis rendszer használata), specifikus primereket (10 μM) és egyéb releváns fogyóeszközöket, műszert.
2. Tegye a 2× Direct RT-qPCR puffert, az RNase-Free ddH2O-t és a 20× ROX referenciafestéket (ha szükséges) a dobozba jéggel, hogy ezek természetesen megolvadjanak, és óvatosan keverjük össze.
B: RT-qPCR rendszer előkészítése
Szerezze be a reakciórendszer reakciópufferének felét (például ha a rendszer térfogata 20 μL, akkor 10 μL 2× Direct RT-qPCR puffert kell kapnia). Mertmegfelelő mennyiségű enzimet, azt javasoljukM-MLV: 10-30 U/20 μL reakciórendszer,TaqDNS polimeráz:1-2 U/20 μL reakciórendszerez a mi javaslatunk, tesztelje és módosítsa), adjon hozzá RNS-templátot, specifikus primereket és próbákat, és adjon hozzá RNáz-mentes ddH-t2O-tól 20 μL-ig.Az RT-qPCR reakciórendszer konkrét elkészítésére az alábbi 1. táblázatban olvashat.
1. táblázat: Az RT-qPCR rendszer elkészítése
| Összetevő | Hangerő | Végső koncentráció |
| 2× közvetlen RT-qPCR puffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNS polimeráz | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Fordított alapozó (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Szonda (4 μM) | 1 μL | 200 nM |
| Sablon (RNS vagy lizátum) | X μL | |
| 20× ROX referenciafesték | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Teljes hangerő | 20 μL |
Megjegyzés: A Forward Primer és a Reverse Primer a célgén specifikus primerei.A qPCR rendszere a gyakorlati kísérleti és PCR modellekhez igazítható volt.A legtöbb primer végső koncentrációjához 400 nM-t ajánlunk.Kérjük, állítsa be a konkrét primerek és szondák térfogatát az elkészített koncentrációnak és az ajánlott végső koncentrációnak megfelelően.
1*: Válassza ki a ROX Reference Dye megfelelő végső koncentrációját a különböző kvantitatív PCR-műszerek szerint.A szokásos kvantitatív PCR-műszerek optimális ROX referenciafesték-koncentrációja az alábbi táblázatban látható:
| Kvantitatív PCR műszerek | A ROX referenciafesték végső koncentrációja |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,stb. | 1× (például adjunk hozzá 1 µl 20×ROX referenciafestéket 20 µl-es reakciórendszerben) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P és Mx4000 stb. | 0,5 × (például adjon hozzá 0,5 μl 20 × ROX referenciafestéket 20 μl-es reakciórendszerben) |
| Roche PCR műszer, Bio-Rad PCR műszer, Eppendorf kvantitatív PCR műszer stb. | ROX referenciafesték nélkül |
Tárolás és eltarthatóság
A készletet -20 ± 5°C-on kell tárolni.Azonnal tárolandó -20 C-os termosztatikus hűtőszekrényben.Az érvényességi idő 2 év megfelelő állapotban történő tárolás esetén.
